获得植物转基因植物需要哪些步骤1
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发布时间：2023-09-19 17:48
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时间：2023-09-19 17:49
一、基因克隆
必须得有这个需要被转的基因。现在最广泛使用的BT蛋白基因和抗草甘膦基因，就来自于两种细菌。因此，细菌来源的基因，也可以在植物中起作用。通过序列比对和分析，并加上如今丰富的基因组数据库，我们可以很容易的找到和确定目标基因的序列。然后，利用最常用的PCR手段，就能将我们所需的基因片段，从原来的生物基因组中克隆出来。
二、载体构建
把这一段目的基因，通过酶连接到一个特定质粒分子上，构成一个插入目的片段的新的质粒分子。
三、转化
这一步需要用到农杆菌。农杆菌是一类土壤细菌。在它“从良”之前，它经常会侵染植物，让侵染部位细胞大量*，形成小疙瘩，我们称为“冠瘿”。利用生物工程手段改造了农杆菌这一区段DNA，保留了农杆菌将自身片段插入植物能力，但是去除了合成生长素和营养物质的基因，并且还加入了一些“装载位点”，方便我们“装货”。这段被改造的DNA，其实就是我们上面说到的特定的质粒分子。等目的基因被包装好之后，就会把它转入农杆菌体内，然后，携带有包装好目的片段的农杆菌，就可以去侵染植物了。由于植物具有厚厚的细胞壁，因此，人们一般选择较为幼嫩的部位来让农杆菌侵染，对于玉米，多使用花粉管来侵染，而对于大豆，则采用茎尖分生区来侵染。在侵染后，农杆菌这个勤劳的运输员，就将携带（但不止含有）目的基因的DN*段转入植物体内，并整合到植物基因组上，来完成“运输”和“安装”过程。除了农杆菌转化外，还可以利用基因*或电转化法进行转化。
四、筛选
当DN*段插入植物基因组后，这个基因能够产生一定的信号，告诉人们“货已到位”。这个基因就是报告基因。通常使用的报告基因是一个编码能够分解抗生素的基因。
当这个基因进入植物基因组后，植物组织就不再害怕培养基中添加的抗生素了，这样，能在培养基上存活的，就都是“货已到位”的植物组织了。这一方法十分便捷，因此在科研中很常用，第一代转基因作物也大多采取这一策略。不过，对抗抗生素毕竟会引起一些人对于抗生素抗性泛滥的担忧。虽然转基因植物对抗生素的抗性很难传播，但是为了打消人们的忧虑，科学家们还研发了“非抗生素筛选体系”。但是，事情还没有完全结束，这些“转基因植物”还需要通过一个十分重要，但也经常被外行人忽略的检测，那就是判断目的基因是否正常表达。由于目的基因的性质十分多样，因此，检测的手段也是多样的。例如，通过热不对称交错PCR，我们可以确定目标基因在植物基因组上插入的位置、通过Real-time PCR以及western杂交检测目标基因表达水平、甚至通过转录组和代谢组学技术分析植物基因组规模的表达以及产物变化的情况等等。但对于要生产目标是商业化种植的转基因植物来说，原则就是，目标基因所具有的性状一定要产生；同时，尽量不产生其他非目标的性状；如果出现非目标性状，那么也必须是无害的。通过以上检验最终获得的成品，才是一株真正意义上的转基因植物了。
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时间：2023-09-19 17:49
1. 从某一种生物组织器官（如根、茎、叶、花、果实）提取要转入的基因。
2. 在实验室里对该基因进行科学修饰、加工、组装以及功能验证。
3. 利用基因*、农杆菌等转化工具，将基因转入另一种生物的未成熟胚或其它组织细胞。
4. 进行组织培养，通过细胞分化、植株再生等过程，获得转基因植株幼苗。
5. 对幼苗植株进行转入基因检测，筛选转入基因已插入受体生物基因组中的植株幼苗。
6. 对阳性植株进行田间种植、扩繁，通过对优异性状的筛选、转入基因的检测，获得稳定遗传的植物转基因后代新品系。
7. 进行安全评价、中间试验等一系列过程。
8. 通过审定推广。
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时间：2023-09-19 17:50
分：分离目的基因
切：用*性内切酶切目的基因和载体，使之具有相同的末端
接：用连接酶将载体与目的基因进行连接
转：将连有目的载体转入到受体菌
筛：筛选出转入成功的受体菌，使之侵染植物，即可得到转基因的植物
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时间：2023-09-19 17:50
