如何让一个细胞过度表达某种基因，来观察此基因的作用，瞬时转染和稳定转染都用什么方法

发布网友发布时间：2022-04-26 17:49

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热心网友时间：2023-10-18 23:19

转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量，所以会有很多质粒。一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外，还需要带有标记基因。标记基因可以被特定的抗体检测，从而判断是否有效表达。如果你要过表达的是某种蛋白，也可以直接通过该蛋白的抗体检测，对照是没有转染的同种细胞，这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了。过表达倒没什么标准，每种蛋白表达量也不一致，选择适合自己的浓度就好。
顺转的话，我们实验室采用lipo2000，具体步骤百度文库有，英文的protocol在lipo2000的说明书上也能看到。
稳转的话一般需要在质粒上构建某个抗性基因，如嘌呤霉素抗性。这样用抗性培养基多次筛选就可以筛选出稳转的细胞株，但是比较难。

热心网友时间：2023-10-18 23:19

瞬转的方法有多种：磷酸钙转染法，PEI转染法，lipofectamine2000试剂盒转染。价格递增。一般容易转染的细胞用前两种方法。而比较难转染的肿瘤细胞等则用lipo2000转染。但用PEI和lipo对细胞产生的毒性比用磷酸钙法大。
稳转一般都通过抗性筛选，前面已经回答过了，就不赘述了。
这些转染都是使细胞通过多个质粒。

过表达一般通过western blot来检测。过表达后蛋白表达量比原始细胞有显著升高则说明过表达成功。

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