含有flox的雌鼠带有cre会怎么样

发布网友 发布时间：2022-04-24 08:52

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热心网友 时间：2022-06-18 05:18

鼠鼠谓命科实验室明星,功鼠鼠模型谓命科帮手.能想自设计或解条件性基敲除鼠,做结,供家参考.条件性基敲除鼠设计利用Cre/LoxP或Flipe/Frt原理.都位点特异性重组酶系统.Cre/LoxP系统例.比待敲除段目标DNA序列两端各放置loxP序列,flox(flankedbyloxP)鼠.flox鼠与带细胞特异性表达Cre鼠交配繁殖,获特定细胞目标基敲除掉鼠,即条件性基敲除鼠.外,若与控制Cre表达其诱导系统(比CreERT2)相结合,某基同实现空两面*.Cre/loxP系统源于噬菌体,介导位点特异DNA重组.该系统含两组：段34bpDNA序列(LoxP序列),含两13bp反向重复序列8bp核序列.LoxP向由间8碱基决定.段LoxP序列Cre重组酶识别位点.令组部Cre重组酶.由噬菌体编码种由343氨基酸组蛋白.Cre介导两LoxP位点重组,引起两LoxP间DNA序列缺失.Cre重组酶cDNA通基工程手段置于组织或细胞特异性启,Cre组织/细胞特异性表达Cre鼠,叫Cre工具鼠.跟Flox鼠交配,条件性基敲除鼠.所谓Flox鼠指某基某外显两侧各放LoxP序列.段序列FlankedbyLoxP,叫做Flox鼠.种Flox鼠般要通设计构建打靶载体、胚胎干细胞重组、囊胚显微注射、嵌合体鼠传代获.种鼠跟Cre工具鼠交配,由于Cre表达,介导两LoxP位点序列重组,敲除两LoxP间序列.由于同Cre工具鼠Cre表达组织/细胞特异性,达同组织、细胞特异性敲除目基目标.比皮细胞、胸腺细胞、T细胞、B细胞、肌细胞、肠道、肺脏等.何设计条件性基敲除鼠呢?所说设计主要Flox鼠设计.所谓条件性敲除,说除特定细胞外,其细胞面没任何基表达异.般情况,要第外显前面放置LoxP序列.第外显前面般启.放置LoxP序列能破坏或改变启性.条件性敲除般敲掉早引起移码突变外显.,要敲除起始密码ATG外显.否则,基能利用ORF内ATG编码缺少部N端序列蛋白,蛋白能全部或部野蛋白功能.选择要敲除外显候(各放LoxP外显两侧),该外显碱基数目能3N,否则新基pre-RNA拼接mRNA能产移码突变.产与野蛋白相比少段间序列新蛋白.外显碱基数目3N+1或3N+2,敲除外显产移码突变,达基敲除目.筛选要敲除(Floxed)外显候,般游外显始筛选适合敲除外显.需要注意,般dna析软件能确定内含外显边界,需要仔细核.95%边界遵循gt/ag边界原则.Ensembl查基外显内含.网站结绝部确.需要仔细核.毕竟基敲除鼠研发间比较程,需要特别.前期做少考虑都嫌.些原则般课题考虑.特殊情况需要特殊处理.