发布网友 发布时间:2023-06-26 00:21
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热心网友 时间:2024-11-19 20:33
盐析沉淀蛋白质的原理是如下:
盐析是一种常用的蛋白质分离和富集方法。在该方法中,通过加入足量的盐使得蛋白质失去溶解性而析出。其原理基于蛋白质的溶解度与环境离子浓度的关系。
在蛋白质溶液中,一方面与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。
常用的中性盐有氯化钠、硫酸钠等,但以硫酸铵为最多。得到的蛋白质一般不失活,一定条件下又可重新溶解,故这种沉淀蛋白质的方法在分离、浓缩,贮存、纯化蛋白质的工作中应用极广。
蛋白质分子是由不同极性、电荷等特征的氨基酸构成,具有复杂多样的结构和性质。在水中,它们处于其中极化的分子会相互作用,并呈现出一定的溶解度和稳定性。而外部添加电解质(如盐)时,会使水中的离子浓度升高,从而影响到蛋白质的溶解度。
具体来说,当盐的浓度升高到一定程度时,盐中阴阳离子会与蛋白质分子中固有离子(如羧基、氨基)进行竞争键合,从而引起蛋白质分子的溶剂化层的变化。
随着盐浓度的持续增加,蛋白质分子的溶解性逐渐下降,蛋白质分子形成微小颗粒并沉淀下来。这种颗粒化现象通常发生在离子强度在0.2M及以上时。
盐析沉淀法可以用于分离和富集蛋白质。首先将待分离的混合物加入到高浓度的盐溶液中,并将其缓慢地搅拌或振荡,以确保样品充分混合。接下来,用离心机将沉淀离心,使其沉淀在离心管的底部。最后,将上清液取出作为去除重复的步骤。
盐析沉淀法具有简单、便捷、快速等优点,能够在短时间内分离目标蛋白质,不需要复杂的设备和操作。
但是,它仅适用于那些蛋白质稳定、PH值在中性范围内、无明显电荷表面、溶解度对离子强度较敏感等特性的蛋白质分子,同时还需要注意监测盐量,防止过高的盐浓度破坏样品。