哪位可以分享转染raw 264.7细胞经验?

发布网友发布时间：2022-04-25 13:00

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热心网友时间：2024-08-05 02:20

为了转染raw 264.7小鼠巨噬单核细胞我们实验室尝试了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它转染试剂，对于我们8000bp的质粒DNA基本转染后都没有荧光信号；师兄在中山大学的同学给我们推荐了他们实验室用Zeta Life Advanced DNA RNA货号AD600050转染raw 264.7细胞经验分享。

按照中山大学师兄给出的方法并结合我实验室情况我把自己在6孔板转染raw 264.7细胞的相关经验整理如下，希望对你转染raw 264.7细胞有一定的帮助，下面是我首次用转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片，后期进一步优化后的新图片我也会随后呈上：

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。

2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life Advanced Transfection Reagent AD600050转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、注意事项：

1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等转染试剂；

2细胞培养基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清，Gibco公司DMEM;