A549细胞转染问题

发布网友 发布时间：2022-04-25 15:05

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热心网友 时间：2023-04-26 07:26

按照我的了解siRNA的转染是不带荧光标记的，你应该转是质粒DNA吧，请先确定一下；
如果您转的是sirna，但是发现没有转进去，请先观察一下你的细胞情况，很有可能是因为细胞引起的转不成功，一般不介意您直接换转染试剂；
转染问题还不可以解决的话可以留言给我。

热心网友 时间：2023-04-26 07:27

Lipo 2000应该是能转染进去的，我们实验组也用过，转染效率倒还可以，只是对细胞毒性确实大了点，后来用了其他实验室同学推荐的RFect，转染效率跟Lipo 2000差不多，但是细胞毒性明显小

热心网友 时间：2023-04-26 07:27

The following tips with an uncertain source are just for reference:
1 质粒DNA或脂质体含有血清，或混和液中含有血清。对策：用无血清培养基或invitrogen配置的Opti-MEM培养基。
2 质粒DNA和转染试剂的比率不是最优对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和脂质体的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。
3 稀释及混和孵育质粒DNA、脂质体的时间过短对策：质粒DNA和脂质体分别稀释孵育5分钟，然后将两者混和孵育20分钟
4 质粒DNA 已部分降解或质量不够好对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DNA质量，正确保存，确保质粒DNA不被降解
5 细胞密度不是最优脂质体2000的在细胞密度>90％时有比较好的转染效率，密度低于70％时可选Optifect 转染剂
6 混和加入细胞中不含血清在转染过程中使用含有血清的培养基，细胞状态良好有利于转染效率的提高。
7 转染体系中含有抑制物转染体系中不应包含抗生素、EDTA、柠檬酸、磷酸盐、RPMI、硫酸软骨素、透明质酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖
8 检验转染效率及表达的方法有问题使用报告基因来检测转染效率，报告基因使你确定目标基因的表达
9 启动子及增强子不被包装细胞识别确认你构建质粒上的启动子增强子与靶细胞相容
10 转染试剂保存不正确转染试剂保存在4℃。

热心网友 时间：2023-04-26 07:28

A549细胞可以用RFect小核酸转染试剂，有国际专利的，转染效率可以做到90%以上，而且细胞死的也比较少。

热心网友 时间：2023-04-26 07:28

师兄给我介绍用美国invigentech(英克) INVI DNA RNA Transfection Reagent转染试剂，IV1216150转染质粒DNA和siRNA的效果还可以，如果你需要具体优化条件和转染图片等信息可以私信我。