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如何从FFPE样品中提取DNA

发布网友 发布时间:2022-04-25 14:08

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热心网友 时间:2023-10-08 13:22

如何从石蜡组织切片(FFPE)中提取DNA 这个要根据你的实验目的和想要达到的效果来旦功测嘉爻黄诧萎超联选择,各有千秋。我之前因为实验问题,在网上咨询过中洪博元,我整理一些给你参考下: 1.从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片,而那些稳定的抗原,能经受住石蜡切片的的考验,一般来讲也可以用冰冻切片来做,总得来讲,对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原,用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。 2.从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确,而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构,并造成抗原的弥散,从而定位不准确。 3.从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好,而石蜡切片在组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。 4.从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单,而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程,比较繁琐。 5.总之,石蜡切片对标本的长期保存较合适,且组织细胞形态结构保持好;而冰冻切片适合对新鲜组织的制片,然后立即固定、染色效果较好,且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
FFPE样本的核酸提取

石蜡样本在提取前需要进行切片处理,一般需要5-6个切片,一片镜检确定肿瘤细胞含量,其他进行后续提取处理。切片的薄厚程度对后续观察和提取会有一定影响。切片过厚不利于后续染色和组织学观察,而且组织脱蜡和蛋白酶消化困难增加;切片过薄易造成DNA的机械损伤,同时切片总面积的增加,其表面黏附的PCR抑制因子...

环状RNA成环验证实验哪里能做?

研载生物可以提供环状RNA成环验证实验服务,欢迎咨询!1.琼脂糖凝胶电泳实验分别用Divergent primer 和Convergent Primer 检测cDNA样品和gDNA样品。对照组为GAPDH,分别使用Diveraent PrimerConveraent PrimerCDNA和gDNA中检测环状RNA和GAPDH,在...

FFPE样本制备及DNA提取知多少

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ffpe 提取dna 一般浓度和纯度是多少

rtpcr时提取rna的浓度和纯度要求:浓度20ng/ul以上足够了,如果用的是组织提取,浓度一般很高,可以达到几百甚至几千。如果你用的是病毒、少量细胞,浓度低一些也没有关系。纯度需要用仪器测一下。260/280理论值应该有2.0以上,260/230值1.2以上基本合格。RT-PCR:最重要的是RNA是否有明显降解,这个...

磁珠法提取DNA的原理是什么?求懂的人指导下!

关键原理是有一些磁珠可以吸附DNA吧。比如成都新百基生物的FFPE DNA提取试剂盒,里面含有能够捕获DNA的磁珠,通过新百基特别设计的缓冲液和简便高效的流程,从FFPE样本中,纯化得到DNA产物。

一抗说明书中写了能做IF,可以用于染石蜡切片吗

3.从抗原的保真性来看,而有的一抗只能做冰冻切片如何从石蜡组织切片(FFPE)中提取DNA 这个要根据你的实验目的和想要达到的效果来选择,而石蜡切片在组织固定,各有千秋,然后立即固定,脱水。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片。我之前因为实验问题,这时只能用冰冻切片来做、抗原修复等过程;而...

石蜡包埋组织中的dna和rna不会降解么

DNA和RNA的降解主要依靠相应的DNA酶和RNA酶,酶的对工作环境温度等有要求,而石蜡包埋之前的N道程序就是为了破坏这一环境,同时保存DNA和RNA,不过由于自然界中RNA酶的种类及分布大于DNA酶,所以DNA更容易保存,从石蜡里提DNA也是常见操作 总的来说还是会降解,不过就是不容易降解了 ...

如何榨干一张FFPE样品,多组学研究思路盘点

然而,福尔马林处理会引发DNA/RNA片段化与蛋白交联,影响样本质量,限制后续研究。丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特的FormaPure XL FFPE样本核酸提取试剂盒能显著改善这一问题,提升样本质量,保证后续基因组/转录组分析的可行性。配合Biomek i7自动化工作站,实现从核酸提取到捕获后PCR产物纯化的高效流程,确保...

核酸提取的方法、适用标本与检测项目

哺乳动物的DNA主要存在于有核的白细胞中,提取前需分离或裂解无细胞核的红细胞。特殊医疗样本如血清、血浆、鼻咽拭子、痰液、支气管/肺泡灌洗液、腹水、病毒、粪便、FFPE样本等,细胞数量较少、成分相对复杂,需在采样和保存途中使用特殊保存液,以抑制核酸酶对样本的降解作用。FFPE样本需先用二甲苯或...

知识分享 | 核酸提取基础篇(一)

核酸提取是指从复杂的生物样品中分离和提取DNA或RNA分子,目的是为了获取纯净的核酸样本。核酸提取通常是分子生物学研究的第一步,其质量的高低直接关系到后续实验的成败。无论进行PCR、q-PCR、克隆、建库测序等实验,都需要高质量的核酸作为基础。在核酸提取过程中,既要满足下游应用对纯度、浓度、得率的...

干货分享 | 一文带您全面了解FFPE样本

近年来,针对这些问题,科研人员开发了针对FFPE样本的特殊提取试剂盒和文库构建技术,改善了样本的DNA和RNA质量。如今,FFPE样本已广泛应用于基因组、转录组、蛋白组、代谢组甚至微生物组的研究,包括表观遗传学和空间转录组分析。随着技术的不断进步,FFPE样本有望成为科学研究中的常规样本,其应用潜力仍在...

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