PCR中正向引物和反向引物的概念和具体作用?

发布网友 发布时间：2022-04-25 19:39

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热心网友 时间：2022-06-16 19:23

正向引物和反向引物是相对的，通常以一个双链DNA（上面的那条链）的上游结合部位称为正向引物，是从左到右的方向，也就是5-3的方向，而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物。

其方向是从右到左的，因为下面的链的方面从左到右是3-5，从右到左就是5-3了，PCR的扩增的确是一条引物就可以扩增了。

反向引物的存在可以结合互补链，使互补链的扩增方向也是5-3，这样一次就是两条链同时扩增，循环一次就是4条链同时扩增再循环一次就是8条链同时扩增，这样才是所谓的几何级数扩增。

正向合成时延伸到反向引物结合位点时就会停止，同理反向引物也是。

扩展资料：

PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。  

因为在同一PCR反应中，是用一个退火温度的，为了保证目的片段两端的引物都能与模板配对互搭，所以在设计引物时，尽量使两个引物的Tm值不要差别太大。

一般引物长度为15~30碱基，扩增片段长度为100~600碱基对。 一般引物序列中G+C含量一般为40%~60%。而且四种碱基的分布最好随机。 同时引物之间也不能有互补性，一般一对引物间不应多于4个连续碱基的互补。 

引物确定以后，可以对引物进行必要的修饰，例如可以在引物的5′端加酶切位点序列；标记生物素、荧光素、地高辛等，这对扩增的特异性影响不大。但3′端绝对不能进行任何修饰，因为引物的延伸是从3′端开始的。

还需提醒的是3′端不要终止于密码子的第3位，因为密码子第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。

参考资料来源：百度百科——聚合酶链式反应  

参考资料来源：百度百科——引物

参考资料来源：百度百科——反向引物

热心网友 时间：2022-06-16 19:23

热心网友 时间：2022-06-16 19:24

热心网友 时间：2022-06-16 19:24