亲和层析的基本原理是什么？41

发布网友发布时间：2023-09-14 13:55

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热心网友时间：2024-11-30 05:57

亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。

所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。此法具有高效、快速、简便等优点。

扩展资料：

亲和层析过程中的注意事项

1、上样

亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。

2、洗脱

亲和层析的另一个重要的步骤就是要选择合适的条件使待分离物质与配体分开而被洗脱出来。亲和层析的洗脱方法可以分为两种：特异性洗脱和非特异性洗脱。

由于亲和吸附达到平衡比较慢，所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件，可以通过适当的改变其它条件，如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等，来缩小洗脱时间和洗脱体积。

非特异性洗脱选择洗脱液的pH、离子强度时应注意尽量不影响待分离物质的活性，而且洗脱后应注意中和酸碱，透析去除离子，以免待分离物质丧失活性。

参考资料来源：百度百科-亲和层析

热心网友时间：2024-11-30 05:58

生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特
性，如抗原与抗体，酶与底物或抑制剂，激素与受体等，这种结合往往是
专一的而且是可逆的，生物分子间的这种结合力称为亲和力，亲和层析的
分离原理简单地说就是通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶
性的基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一
个分子进行分离纯化。被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价
结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂，蛋白质的生物特异性
可以帮助选择特异性的配体，一般是目的蛋白质与配体结合而不吸附杂质。
蛋白质吸附后再利用洗脱液的快速变换和加入竞争剂的方法进行洗脱。