CTAB的作用?

发布网友 发布时间：2022-05-02 03:08

我来回答

共2个回答

热心网友 时间：2022-06-27 11:06

CTAB是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白,多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA,而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。

步骤

（1） 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

（2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状。

（3） 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动。

（4） 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二。

（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min后取出。

（6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀。

（7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中。

（8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物。

（9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上。

（10）60 sec后，直立离心管，加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中。

（11）放置30 min，使DNA块状物的不纯物溶解。

（12）10000 rpm离心1 min后，倒掉液体，再加入800 ul 75%的乙醇，将DNA再洗 30 min。

（13）10000 rpm离心30 sec后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥DNA（自然风干或用风筒吹干）。

（14）加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液，使DNA溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使RNA消解。

以上内容参考 百度百科-CTAB法

热心网友 时间：2022-06-27 11:06

参考资料：http://www.bbioo.com/bio101/2006/6855.htm