发布网友 发布时间:2022-05-01 11:24
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热心网友 时间:2023-10-09 20:17
顺次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇:水=10:90(V/V),已腈,异丙醇作为流动相冲洗色谱柱,完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
ODS柱是十八烷基硅烷键合硅胶填料(Octadecylsilyl,简称ODS)。
色谱柱的保存
一、反相色谱柱每天实验后的保养
使用缓冲液(或含盐)作流动相,每天实验完成后,应用10倍柱体积的不含且可溶解缓冲盐的流动相冲洗色谱柱,便色谱柱中的盐完全洗掉。
应特别注意:不能用纯有机溶剂直接冲洗色谱柱,以防止盐析出,堵塞色谱柱或仪器管路,而使色谱柱报废。
二、长期保存色谱柱
如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或纯已睛中,正相柱可以储,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
对使用过含盐浓度较高的流动相的反相柱,在储存之前,必须先用10倍柱体积的不含且可溶,储存的温度最好是室温。
因为高效液相色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。
近年来,为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务,又发展了CH、C3、C4等短链烷基键合相和大孔硅胶(20~40μm)。
ODS柱分类:按键合到基质上的官能团可分为:
⑴反相柱:填料是非极性的,官能团为烷烃,例如:C18(ODS)、C8、C4等。
⑵正相柱:填料是极性的,官能团为-CN氰基、-NH2氨基等。
⑶离子交换键合相: 阳离子官能团:-SO3H磺酸基、-COOH羧基等。 阴离子官能团:―R4N+季铵基、-氨基等。