DNA提取血样怎么保存
发布网友
发布时间：2022-05-02 01:03
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热心网友
时间：2022-06-25 22:01
（1）
将冰冻的血在室温下溶化；
（2）
取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中，加入等体积的pbs磷酸盐缓冲液，充分混匀后12000rpm离心5min，弃上清；
（3）
加入667µl
ste，24µl的20%的sds，37℃水浴1h；
（4）
加10µl的20mg/ml的蛋白酶k混匀，55℃水浴消化过夜（10～14h）；
（5）
将消化的样品加入等体积的tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；
（6）
将上层水相转入另一无菌2ml离心管中；再加入等体积的tris饱和酚，充分摇匀，12000rpm离心10min；
（7）
将上层水相转入另一无菌2ml离心管中；并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），旋涡振荡至充分混匀，12000rpm离心10min；
（8）
将上层水相转入另一无菌2ml离心管中；并加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1），充分振荡混匀，12000rpm离心10min；
（9）
将上清液转移到另一无菌2ml离心管中；加入2倍体积的冰乙醇，1/10体积醋酸钠水平摇动，直到可见絮状dna析出；
（10）
将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15～20min，取出后再次12000rpm离心10min，使dna沉淀；
（11）
用*头将dna挑到另一无菌离心管中，用适量的70%乙醇洗涤并晃动，以洗出dna的杂质；
（12）
倒出乙醇，将dna用真空干燥或自然晾干，加入适量的te缓冲液回溶，-20℃保存备用。
