在质粒提取中如有蛋白质残留会有什么现象?如何去除蛋白污染
发布网友
发布时间：2022-04-30 15:02
共2个回答
热心网友
时间：2022-06-25 21:10
在质粒提取中如有蛋白质残留，会出现提取的质粒不纯净的现象，加入溶液III可以去除蛋白污染。
质粒抽主要的目的是为了去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，然后去除蛋白质及其它杂质，如果去除的不够彻底或者有残留，那么得到的质粒就不会相对纯净。
蛋白质的去除，主要是靠不溶解的 K-SDS-蛋白质复合物的形成。虽然将中和后的体系置于 4C 一段时间，可以形成更多的该不溶复合物，从而使蛋白质残留更少，但实践证明这样做并不是必须的，除非是大量抽提。
只要加入溶液 I 后的悬浮，加入溶液 II 后的裂解及加入溶液 III 后的中和是均匀彻底的，蛋白质的残留就应该在可以满足实验要求的水平；而只有溶液的用量足够，甚至过剩，才能确保裂解和中和是彻底的。当然，试剂盒及苯酚的使用，是可以更进一步降低蛋白质的残留的。
扩展资料：
质粒抽提窍门
1、加溶液II（裂解液）后，操作一定要温和，剧烈混合会导致基因组DNA污染。 [4]
2、洗脱时60℃温育（Ellution Buffer）洗脱缓冲液或去离子水效果更好。
3、若质粒提取含量低，可增加菌液样或换用ArtMedia Plasmid Culture，其比LB培养基质粒得量高
4、菌体应彻底悬浮 ， 如果没有彻底悬浮菌体，则残留的菌体团块在溶液 II 加入后，变成难以完全裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后，会有一部分蛋白质继续存在于溶液中，成为蛋白质残留的最大根源。
5、加入溶液 II 后，混匀，体系最好能立即变得清澈。体系如果变得清澈了，马上加入溶液 III 中和。
6、中和的操作 ，在 1.5ml 离心管中加入溶液 III 后，先颠倒两次，使管底朝上，用指头弹击管底数次，再颠倒混匀。效果非常好。
参考资料来源：百度百科-质粒抽提
热心网友
时间：2022-06-25 21:10
加溶液3要混合充离取清要吸白色沉淀组蛋白包着基组DNA
