什么是蛋白裂解液
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发布时间：2022-04-20 09:38
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热心网友
时间：2023-04-22 23:35
RIPA裂解液。
RIPA裂解液（英语：Radioimmunoprecipitation assay buffer，全称放射免疫沉淀法缓冲液）是一种用于裂解细胞或组织的裂解缓冲液，常用于放射性免疫沉淀分析（RIPA）。此缓冲液的变性性能比NP-40裂解液或曲拉通X-100裂解缓冲液更强，因为它包含离子型去垢剂SDS和脱氧胆酸钠作为破坏核膜，提取核内物质的活性成分。RIPA缓冲液在实验时能提供低的背景，但也会使激酶变性。
RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
扩展资料：
RIPA裂解液使用方法-对于培养细胞样品：
1、融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用*吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
参考资料来源：百度百科-RIPA裂解液
参考资料来源：百度百科-可溶性蛋白质
热心网友
时间：2023-04-22 23:36
Western、IP 等。主要成分为50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40， 0.1% SDS。
使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有
较高浓度的去垢剂，不能用Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存条件：4℃
制备细胞裂解产物：
1、800g 4℃离心5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells ≈ 20ul PCV,
107 cells ≈ 100 ul PCV)
2、每50~100ul PCV 加入5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul）,冰浴中放置10 分钟，且每隔5
分钟在漩涡混合仪震荡30 秒；
3、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物；
4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心
10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
制备组织裂解产物：
1、取50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS 洗涤2 次，离心弃去PBS；
2、加入0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液；
3、4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40 次，直到95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10 分钟，且每
隔5 分钟在漩涡混合仪震荡30 秒；
4、12000g 4℃离心10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可95℃加热5 分钟，然后迅速冰浴5 分钟，12000g 4℃离心
10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。
6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃。
