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aflp什么意思

发布网友 发布时间:2022-05-01 01:41

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热心网友 时间:2022-06-22 01:06

AFLP(amplified fragment length polymorphism)技术是一项新的分子标记技术,是基于PCR技术扩增基因组DNA*性片段,基因组DNA先用*性内切酶切割,然后将双链接头连接到DN*段的末端,接头序列和相邻的*性位点序列,作为引物结合位点。*性片段用二种酶切割产生,一种是罕见切割酶,一种是常用切割酶。它结合了RFLP和PCR技术特点,具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。由于AFLP扩增可使某一品种出现特定的DNA谱带,而在另一品种中可能无此谱带产生,因此,这种通过引物诱导及DNA扩增后得到的DNA多态性可做为一种分子标记。
AFLP可在一次单个反应中检测到大量的片段。以说AFLP技术是一种新的而且有很大功能的DNA指纹技术。
AFLP反应流程:
AFLP反应程序主要包括模板DNA制备,酶切片段扩增及凝胶电泳分析这3个基本步骤。各步骤具体的过程有:
首先要制备高分子量(HMW)基因组DNA,选择6个碱基识别位点的*性内切酶(通常是EcoRI或PstI或SacI)。
酶切后的*性片段在T4连接酶的作用下与特定的接头相连接,形成带有接头的特异性片段。
DN*段的预扩增。
在Taq聚合酶的作用下,完成AFLP的选择性扩增。
PCR产物变性后在含尿素的聚丙烯酰胺变性胶上电泳。
多态性比较分析,特异片段回收克隆分析。
Genomic AFLP
cDNA-AFLP
AFLP技术的应用:
AFLP具有可靠性好,重复性强,可信度高等优点,近年来广泛应用于遗传育种研究,在动物遗传育种、动物基因组研究中有着广泛的应用前景。如:
构建遗传连锁图谱
利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记
AFLP辅助的轮回选择育种
利用AFLP技术研究基因表达与*
分类和进化研究
甲基化研究
AFLP 技术主要特点:
(1)分析所需 DNA 量少,仅需 0.5μg。也可以用作于线粒体 DNA。从线粒体中得到RFLP 研究所需的几十到上百μg 的 DNA 是很困难的。Roseudahl 和 Taylor(1997) 成功地从一种真菌(Mycorrhizal fungi) 的单个孢子中得到 AFLP 标记,而每个单孢子仅产生约0.1~0.5μgDNA。另外,AFLP 反应对模板浓度的变化不敏感,DNA 浓度在 1000 倍的范围内变化时对反应的影响都不太大,所产生的指纹图谱十分相似。
(2)可重复性好。AFLP分析基于电泳条带的有或无,高质量的DNA和过量的酶可以克服因DNA酶切不完全而产生的失真,PCR中较高的退火温度和较长的引物可将扩增中的错误减少到最低限度,因而AFLP分析具有很强的可重复性。Jones等(1997)在欧洲8个实验室使用共同的样本,进行严格的实验,将得到的DNA图谱进行比较,172条谱带中仅一条出错,误差小于0.6% 。
(3)多态性强。AFLP 分析可以通过改变*性内切酶和选择性碱基的种类与数目,来调节扩增的条带数,具有较强的多态分辨能力。设计不同的人工接头就会相应地产生不同的 AFLP 引物,引物 3'端的选择性碱基数目可以是 2+2, 2+3 也可以是 3+3,这些碱基的组成也是多种多样的。由于 AFLP 引物设计的巧妙与搭配的灵活,使得 AFLP 能产生的标记数目是无限的。迄今为止,每个 AFLP 反应能检出多态片段之多,信息量之大,效率之高是其它任何一种分子标记所无法比拟的。
(4)分辨率高。AFLP 扩增片段短,适合于变性序列凝胶上电泳分离,因此片段多态性检出率高,而 RFLP 片段相对较大,内部多态性往往被掩盖。
(5)不需要 Southern 杂交,无放射性危害,且不需要预先知道被分析基因组 DNA的序列信息,是一种半随机的 PCR。(6)样品适用性广。AFLP 技术适用于任何来源和各种复杂度的DNA ,如基因组山东农业大学博士学位论文29DNA、cDNA、质粒、某一个基因或基因片段,且不需要预知这些DNA 的序列特征。用同样一套*酶、接头和引物,可对各种生物的DNA 进行分子遗传标记研究。
(7)稳定的遗传性 AFLP 标记在后代中的遗传和分离中符合Mendel式遗传规律,种群中的 AFLP 标记位点遵循 Hardy-Weinberg 平衡总之,在技术特点上,AFLP 实际上是 RAPD 和 RFLP 相结合的一种产物。它既克服了 RFLP 技术复杂、有放射性危害和 RAPD稳定性差,标记呈现隐性遗传的缺点;同时又兼有二者之长。近几年来,人们不断将这一技术完善、发展,使得 AFLP 迅速成为迄今为止最有效的分子标记。

热心网友 时间:2022-06-22 01:07

AFLP技术是一项新的分子标记技术,是基于PCR技术扩增基因组DNA*性片段,基因组DNA先用*性内切酶切割,然后将双链接头连接到DN*段的末端,接头序列和相邻的*性位点序列,作为引物结合位点。
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