如何应用流式细胞仪检测荧光蛋白的表达量?

1.细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块.如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用.2.细胞悬液的浓度不能过高和过低.详请参考你的仪器说明建议值.我的经验每毫升一百万足足够了.少些读取慢些也没有大问题,一支样品少过十万的话,就很容易得不到足够的数据.太多则读取过快,准确性可能降低,更多更危险,可...

一般流式细胞仪都有FITC通道,GFP可以用该通道来测量.用同一细胞系的转染了无GFP质粒的细胞做阴性对照,设置阈值.

可以，这个和western定量的原理类似，需要有标准品来作比对。不过很难。因为流式主要是用来最相对量的比较的。细胞内的蛋白，用荧光标记的单克隆抗体识别后，用流式可以测出每个细胞的相对荧光强度。有一种特异性的微球，可以吸附一系列不同定量分子数的抗体。这种微球吸附同样的荧光抗体，可以做出荧光强度...

流式细胞仪只能检测相对量。所以你可以比较两组细胞间的表达量，比如看是否有表达（和阴性对照相比，或者A组是B组的多少倍）。但是不能得到绝对的表达量。通常是带上一个报告基因，比如绿色荧光蛋白，然后在镜下观察看发光的和不发光的细胞比.或者，你有好几个不同的细胞组，已知他们的绝对表达量，用...

荧光检测是流式细胞仪工作的重要环节，细胞需经过特定荧光染色后，通过光源激发发出荧光。常用的光源包括弧光灯和激光，如氩离子激光器，甚至是结合氪离子激光器或染料激光器。选择光源的关键是匹配被激发物质的光谱特性，例如汞灯在紫外光激发领域广泛使用。样品的分选过程依赖于细胞分选器，其基本步骤是：液...

使用流式细胞仪进行分析，确保获得准确结果。在荧光显微镜下观察细胞时，滴一滴双染细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片覆盖。对于贴壁细胞，可直接在盖玻片上培养并诱导细胞凋亡。使用双色滤光片在荧光显微镜下观察，Annexin V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。在观察时，注意细胞群体的分化，识别出...

流式细胞仪只能检测相对量。所以你可以比较两组细胞间的表达量，比如看是否有表达（和阴性对照相比，或者A组是B组的多少倍）。但是不能得到绝对的表达量。通常是带上一个报告基因，比如绿色荧光蛋白，然后在镜下观察看发光的和不发光的细胞比.或者，你有好几个不同的细胞组，已知他们的绝对表达量，用...

流式细胞仪不能检测游离的Ig，但是如果细胞表面结合有IgG或者IgM等免疫球蛋白，则这些免疫球蛋白可以被抗免疫球蛋白的抗体识别。如果这些二抗被荧光染料标记，就可以用流式细胞仪来检测细胞表面是否有免疫球蛋白附着了。

3. 表达荧光蛋白的细胞可以进行固定。使用4%的多聚甲醛固定10分钟，随后用PBS冲洗一次，再连续冲洗三次，每次5分钟。4. Annexin V不适合用于检测固定的细胞的凋亡，因为固定的细胞胞膜已被破坏，Annexin V会结合胞膜内外的磷脂酰丝氨酸(PS)，导致所有细胞显示阳性反应，失去分析价值。5. 流式染色缓冲液...

当然，流式最大的一个特点就是，可以定量（百分 比），如果是高表达的用流式细胞仪非常有优势。流式检测时要求有抗体，可以是直接标记或简介标记的荧光抗体。细胞需要预先固定处理，常用的是多聚甲醛、TritoonX－100、75％乙醇等，具体步骤可参考相关文献，都有详细说明。………详细资料请参考：on htt...