构建质粒时，经酶切鉴定片段已经连上了，但是拿去测序总是不准。

发布网友发布时间：2023-10-17 22:47

共3个回答

热心网友时间：2023-12-01 19:07

测序一般900~1000以后就不准了，不可信，你看下峰图就知道了，都乱的。测序只要告诉测序公司测通即可，他们会设计解决这问题的，并帮你拼接好结果发过来，太长大不了测3个么，不用你自己在那儿捣鼓

热心网友时间：2023-12-01 19:08

质粒本身有没有问题？测序时读到质粒序列吗？

热心网友时间：2023-12-01 19:08

　　中间有进行PCR吗？你每一个克隆每一个方向测了几个反应，你能确定那些突变时测序错误的还是真的有突变吗？追问质粒没问题，用的是双向测序，两个反应，两端测出来的是准的，越往中间靠近，测的就越不准，最后干脆就没测通。我觉得，突变不会有那么多，应该是测的问题。

追答　　从你说的来看，大部分不是突变，是测序的错误。2000bp片段，只从两头测估计不行，得再中间设计引物才能完全测通。