如何设计巢氏PCR的第一对引物

发布网友发布时间：2022-04-30 20:21

共3个回答

热心网友时间：2023-10-10 10:23

可以使用primer5 或者primerdesign设计还是主要考虑发夹结构，GC含量，Tm值和引物交叉，还有减少引物二聚体的产生。
如果是扩增启动子的话，建议选择引物的长度30-35bp，一般试剂盒里有接头引物的，只要在下游已知序列设计引物就可以咯

热心网友时间：2023-10-10 10:23

巢式PCR（nested PCR），是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应。
在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。
由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降低了扩增多个靶位点的可能性（因为与两套引物都互补的引物很少）增加了检测的敏感性；又有两对PCR引物与检测模板的配对，增加了检测的可靠性。
一般应用于动物方面。如：病毒，梅毒螺旋体，HIV，肿瘤基因等
巢式PCR，可以在10的六次方基因组背景下检测到一个拷贝的病毒基因，也不像二次PCR容易产生成片的产物，是效果最好的PCR，但也因此是最容易污染的PCR

热心网友时间：2023-10-10 10:24

看了下一楼的.外引物的设计似乎跟普通PCR没有不同。但是为了确保外引物的扩增子内部有合适的位点给内引物，貌似还是先设计内引物较为恰当。