为什么液相走缓冲盐的时候,高压状态下会发生盐析

这样做的主要原因是，流动相中的缓冲盐不可以直接遭遇纯有机相。因为溶解度等原因，可能会出现盐析现象。所以会用甲醇水做过渡。你在冲流动相的时候可以观察基线，平衡后就可以进样分析。但是冲洗色谱柱的时候和基线没有关系。冲洗色谱柱主要是洗去色谱柱中残留的流动相和样品，避免他们对固定相，也就是...

普通色谱柱是不能冲的，主要是由于水会溶解硅胶，导致相坍塌。还有的色谱柱是可以反冲。但是如果使用磷酸盐堵了，久了不用，磷酸盐结晶了，会导致硅胶颗粒受破坏，影响分离效果。 一般而言，色谱柱堵了，可以用10～30的甲醇水走柱子。但是，不知道你使用的是什么牌子的柱子，以及情况严重到什么程度。

最后是调整溶液的温度，通常情况下需要进行低温处理。这是因为温度对蛋白质的稳定性和酶解等具有重要影响。在调整盐浓度和缓冲液后，需要进行冷却处理，这样可以促进蛋白质分子之间的相互作用，从而使蛋白质分子沉淀出来。蛋白质盐析的优点在于方法简便、成本低廉，且适用于大多数蛋白质。另外，盐析过程中不需...

因此,其流动相为多缓冲剂,其蛋白质将以缓慢的速度进行吸附,当洗脱液流进多缓冲交换剂时,流速可调且稳定、保持样品的生物活性等都是有利的,这时多缓冲剂中酸性最强的组分与碱性阴离子交换对结合发生中和作用、维生素和某些蛋白质等)的测定,就可明显地提高柱效。另外。而亲和层析与酶-底物反应不同的是,亦称色谱峰;...

1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“...

异丙醇对色谱柱有伤害。最好不要过柱子。如果系统中有流动相，先用10%的甲醇水冲洗掉，免得无机盐遇到异丙醇之后盐析。然后排气，慢慢地升高流速。有可能柱压会很高，要冲一会儿才能提高流速。我不知道工程师是怎么说的，要多少的流速，冲多久，记得注意压力变化。如果压力下降了，那么可能就是冲开了。

1.1 高效液相色谱(HPLC) HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段,因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比,在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的,更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上,不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性...

中性盐 (如硫酸铵,硫酸钠,氯化钠,硫酸镁等)对球状蛋白质的溶解度有显著影响.随着中性盐浓度的增加,离子强度也增加.当溶液离子强度增加到一定数值时,溶液中蛋白质的溶解度开始下降.离子强度增加到足够高时,蛋白质可从水溶液中沉淀出来,这种现象叫做盐析.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液...

如果在溶液II中不加SDS会怎样呢，也会有少量的沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的 NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。但如果你加入...

稀盐溶液和缓冲液对蛋白质的稳定性好,溶解度大,是提取蛋白质和酶最常用的溶剂。用水溶液提取生物大分子应注意的几个主要影响因素是:  1) 盐浓度(即离子强度):  离子强度对生物大分子的溶解度有极大的影响,有些物质,如DNA-蛋白复合物,在高离子强度下溶解度增加。  绝大多数蛋白质和酶,在低离子...