还为分子克隆阳性率低烦恼吗?无缝克隆了解一下~

发布网友发布时间：2024-06-01 08:30

共1个回答

热心网友时间：2024-07-26 18:41

告别低阳性率困扰，无缝克隆：实验效率的革新者

在分子克隆的世界里，每一步骤都可能成为实验进度的瓶颈。PCR、酶切、连接、转化，每一个环节都需精心把控，但即便如此，阳性克隆的筛选结果却常常不尽如人意。这个时候，无缝克隆技术，特别是汉恒生物的HB-infusionTM 试剂盒，可能就是你的解决方案。

传统克隆与无缝克隆之间的对比，如同图1所示：（a）繁琐的步骤，（b）则是一步到位的高效。无缝克隆（Seamless Cloning/In-Fusion Cloning）的独特之处在于，通过设计具有15-20个同源碱基的末端引物，PCR产物的两端能直接与载体形成互补配对，无需额外酶切和连接，直接进行转化，显著简化了转化过程。

图2揭示了HB-infusionTM 无缝克隆的巧妙原理：PCR产物与载体的同源结合，如同缝合一般，无缝对接，大大减少了错误引入的可能性。

无缝克隆带来的变革

无缝克隆的优势在于其显著的便利性和精准性：

操作简便，只需一次反应就能实现定向克隆，效率翻倍。
无需特定酶切位点，目的片段可以灵活插入载体任意位置。
连接过程中避免了额外序列的引入，保证了产物的纯度。
甚至可以一次处理多个片段，显著节省时间和精力。

无缝克隆的实践步骤

首先，制备线性化载体：通过酶切或PCR方法获取，确保目标片段能与载体无缝结合。
接着，设计PCR引物，确保目的片段两端与载体有15-25bp的同源序列，便于高效拼接。
接下来，配制无缝克隆反应体系，根据片段数量调整反应时间，完成后可冷藏保存。
最后，感受态大肠杆菌转化，次日挑选克隆进行PCR或酶切验证实验结果。

无缝克隆的引入，无疑为分子克隆实验者提供了一个更快速、精确的解决方案。无论你是初次尝试还是经验丰富的实验者，汉恒生物的无缝克隆技术都能帮助你提升效率，减少烦恼。如果你对无缝克隆还有任何疑问，汉恒生物的专家团队随时待命，解答你的疑惑。