大肠杆菌质粒裂解系统
发布网友
发布时间：2024-05-01 12:27
我来回答
共1个回答
热心网友
时间：2024-05-12 11:54
碱性裂解法提取质粒原理如下：
在pH12.0~12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽变性但仍处于拓扑缠绕状态。
将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。
通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。
抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。
当加入乙酸钾恢复至中性时，染色体DNA分子难以复性，而质粒DNA分子很快复性，离心时，染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来，而质粒DNA则留在上清液中，用异丙醇或乙醇沉淀后洗涤、可得到较纯的质粒DNA。
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法，其提取原理是一样的，只需体积按一定比例扩大。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时，对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提。
RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DN*段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。要使用特殊纯化的质粒时，可采用氯化铯方法抽提，但该方法比较复杂，对技术要求高，花费时间长，也比较昂贵。
为什么发酵的大肠杆菌提取质粒时难裂解
细胞壁结构。大肠杆菌的细胞壁是由多层的薄壁和厚壁组成的，其中薄壁含有较少的N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰半乳糖胺（NAM），而厚壁则富含这两种物质，这种结构使得细胞壁难以被裂解，从而影响了质粒的提取。大肠杆菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织...
微生物检测、保藏公司选哪个？
判断一个微生物检测、保藏公司的好坏，不只是看价格，还要考虑很多因素。建议可以多对比几个看看。您可以到广东省科学院微生物研究所了解下。广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）是一家专业的微生物检测、保藏公司！ 广东省科...
提取大肠杆菌DNA时,裂解大肠杆菌最常采用的方法是什么?原理时什么...
最常用的办法是SDS法，在反应体系中加入终浓度约为1%的SDS37度水浴1小时就可以完成大肠杆菌的裂解。现在手提细菌的基因组DNA基本上就是这个办法，具体步骤在分子克隆和精编分子生物学实验指南上都有，是最经典的方法。SDS是一种阴离子去垢剂，能够破坏细菌的细胞壁和细胞膜。
如何提取大肠杆菌质粒DNA?
通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互...
大肠杆菌菌体裂解有哪些原因啊
4、毒性蛋白表达。这种情况很少出现，就是你转化进去的质粒有毒性蛋白的表达，这样就会出现不能大量培养，长到一定程度就会自溶。5、还有一种很无奈的状况，大肠杆菌培养到一定程度就会有一些会自然衰老死亡（可能是连续扩培时培养基没有彻底更换导致），这些死亡的菌体裂解释放出裂解酶，致使越来越多菌体...
如何用碱裂解法抽提质粒(准备篇)
要通过碱裂解法抽提质粒DNA，首先从大肠杆菌中分离质粒是常用方法。以下是详细的步骤准备和试剂准备:1. 原理：使用EDTA和SDS来处理细胞，EDTA破坏细胞壁并抑制DNA酶，SDS则溶解脂质和细胞膜，使蛋白质变性。通过调节pH值，使染色体DNA、质粒DNA变性，而质粒因其小体积特性，在pH降低后保持溶解状态。沉淀可...
基因工程实验Ⅱ大肠杆菌质粒DNA的抽提及检测『Protocol』
材料：含有pSK II质粒的大肠杆菌菌株的菌液、含有MP3质粒的大肠杆菌菌株的菌液 试剂：①细菌的培养：LB培养基、氨苄青霉素 ②细菌的裂解与收集：溶液I（Tris-HCl、EDTA、Glucose）、溶液II（NaOH、SDS）、溶液 III（KOAc、CH3COOH）、RNAseA ③质粒DNA的分离与纯化：酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇、70%乙醇...
大肠杆菌的质粒电泳图有那几条带?分别多少bp
大肠杆菌的质粒电泳图通常会显示多个带，每个带对应一个不同大小的质粒。具体的质粒数量和大小会因不同的质粒样本而异，取决于实验设计和样品来源。一般来说，大肠杆菌质粒电泳图可能包括以下一些主要带：1. 超级融合质粒（Supercoiled Plasmids）：这些是未解旋的质粒，通常迁移速度最快。它们可能对应于质粒...
有关大肠杆菌质粒载体的构建策略包括哪些
1、克隆质粒载体的构建：首先将目的基因的编码序列与质粒载体的复制子序列连接，构建出重组质粒。然后通过转化将重组质粒导入大肠杆菌中，筛选出含有重组质粒的菌落。2、表达质粒载体的构建：将目的基因的编码序列与表达调控序列（如启动子和转录终止信号序列）连接，构建出表达质粒。然后将表达质粒导入大肠杆菌...
碱裂解法提取质粒过程溶菌酶的作用
跟SDS一样，裂解细胞壁释放质粒用的。不过不加也没什么问题，NaOH与SDS足够将大肠杆菌细胞壁裂解开。
什么是大肠杆菌质粒载体?
大肠杆菌质粒载体是应用最广泛的克隆载体，含有大肠杆菌源质粒的复制起始位点，能够在转化的大肠杆菌中按质粒复制的形式进行复制。pBR322是一种常用的典型质粒载体。pBR322由大肠杆菌源质粒emphasis：role=italicColemphasis：E1衍生的质粒pMB1作为出发质粒构建而成，含有emphasis：role=italicColemphasis：E1复制...
