...活力及凋亡检测方法(MTT、流式、细胞爬片HE、免疫组化protocol...
发布网友
发布时间：2024-05-03 08:22
共1个回答
热心网友
时间：2024-06-18 15:51
探索PC12细胞活力与凋亡的多重检测手段</
每日前沿实验技术，不容错过！这里，我们将深入解析PC12细胞活力的测定及凋亡检测的详细步骤，让你更好地理解细胞生物学研究的精密过程。
试剂与准备
首先，为实验提供基础，我们需要以下关键试剂:
含血清培养基，为细胞生长提供营养
MTT溶液（50 mg PBS溶液避光保存），用于细胞活力检测
0.25%胰酶，用于细胞培养处理
PBS缓冲液，保证实验过程的pH稳定
4%多聚甲醛，用于细胞固定
重铬酸钾酸洗液，用于后续步骤的处理
PC12细胞培养与接种
在37℃ CO2培养箱中，使用含血清的培养基培养PC12细胞，确保细胞稳定生长。当进行检测前，将细胞传代至96孔或6孔培养板，以便于后续的MTT和流式细胞仪实验。
细胞活力与凋亡检测
MTT活力评估</: 100 μl细胞接种在96孔板中，待孵育后，通过测量吸光值计算细胞存活率，揭示细胞活力。
流式细胞仪凋亡分析</: 在6孔板中接种细胞，观察并区分活细胞、早期凋亡等不同阶段，揭示细胞生命周期的动态变化。
细胞病理学与免疫组化
对于HE观察和Bcl-2免疫组化，24孔培养板上的细胞经过固定后，将进行:
山羊血清封闭，为后续抗体结合做好准备
Bcl-2抗体孵育，采用特定比例在4℃过夜后37℃孵育1小时
严格洗涤以去除未结合的抗体，随后进行生物素标记和SABC显色
DAB显色，控制显色时间，最后用蒸馏水冲洗
苏木精染色，自来水冲洗后，进一步脱水透明
显微镜下观察并记录结果
免疫荧光检测则以Cyt-c和Bax代替Bcl-2，其他步骤保持一致，确保实验的精确性。
每批细胞实验过程中，阴性对照至关重要，确保实验结果的可靠性和准确性。
