人淋巴细胞分离液操作protocol
发布网友
发布时间：2024-05-02 05:07
共1个回答
热心网友
时间：2024-11-24 02:55
淋巴细胞高效纯化工艺详解：Ficoll-Paque PLUS操作指南</
Ficoll-Paque PLUS，作为一款专为高效提纯人淋巴细胞设计的无菌、即用型密度梯度介质，以其卓越的性能在生物医学研究和临床实践中占据重要位置。它以极低的内毒素含量（小于0.12 EU/mL），确保分离出的单核细胞高达95%以上，细胞存活率超过90%，且回收率稳定在60%左右，为精确实验提供关键保障。
操作步骤如下：</
一、试剂准备
为你的实验准备以下关键材料：
血液样本（去纤维蛋白或添加抗凝剂）：2ml
混合盐缓冲液：2ml（用等体积的蒸馏水溶解，再用10 N HCl调节pH至7.6，定容至1L）
盐缓冲液（PBS或生理盐水）：根据需要配置
每次实验需新鲜配置，盐缓冲液可在4℃保存一周。
二、分离步骤
1. 在开始前，轻轻摇晃淋巴细胞分离液以确保均匀混合。
2. 使用移液管或注射器，取4ml淋巴细胞分离液到离心管中。
3. 混合样本：取4ml血液样本（1:1:2的比例，血液：盐缓冲液：淋巴细胞分离液），小心加入，避免与分离液接触，形成清晰的层次。
4. 在18-20°C，400g离心条件下，进行30-40分钟的离心，分离血浆层。
5. 去除上层血浆，务必轻柔操作，防止淋巴细胞层受到污染。
洗涤步骤
为去除血小板和血浆蛋白，进行以下步骤：
吸取淋巴细胞层至干净离心管，减少杂质的混入。
加入至少3倍体积的盐缓冲液（6ml）以稀释。
用巴斯德吸管轻轻吹打，使细胞层与盐缓冲液充分混合，然后18-20°C，60-100g离心10分钟。
重复此过程，再加6-8ml盐缓冲液，离心10分钟，上层分离液即为血小板层，去除即可。
通过这些细致的操作，你将得到高纯度的淋巴细胞，为你的实验或研究提供优质的细胞资源。
