新手出道!急求:如何将100uL的标准PCR反应体系改为20uLPCR反应体系?是...

10×扩增缓冲液 2ul， 4种dNTP混合物 各200umol/L 2ul， 引物各10～100pmol 0.5ul， 模板DNA 0.1～2ug，Taq DNA聚合酶0.2ul，Mg2+1.5mmol/L 1.5ul，加双或三蒸水至20ul。

G蛋白偶联受体（GPCR）是一类广泛存在于人体细胞膜上的受体蛋白，包括许多亚型如α、β和γ等。其基本结构包括一个七次跨膜结构域和一个胞浆C-末端。GPCR定位于细胞膜上，作为信号传递的关键组件，参与多种生物过程，如细胞信号转导、细胞极化和...

1、产物浓度不同 20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多，进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系，二者除了调配比例之外，所用的酶是相同的，所以反应温...

反应体积的改变:通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul,应用多大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败。物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非特异...

如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特 异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多 大体积进行PCR扩增，...

标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)[编辑本段]〔PCR步骤〕 ...

标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液10ul 4种dNTP混合物各200umol/L 引物各10～100pmol 模板DNA0.1～2ug TaqDNA聚合酶2.5u Mg2+1.5mmol/L 加双或三蒸水至100ul PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)5.3 PCR反应条件的选择 PCR反应条件为温度、时间和循环...

反应体积的改变:通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul,应用多 大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败。 物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非...

PCR程序还可以适当的调整，如果扩增不出来，可以试一试tuckdown的方法 在PCR反应体系使用普通的rTaq（Takara），如果不行，可以将buffer换成G buffer试一试，不要一上来就用特别保守的酶。另外，100bp一下的那个条带，基本上可以认为是引物二聚体，说明你的引物合成的有问题呀！

反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物...

作者用的新buffer叫做TAPS:同时，把转座反应体系由50ul降低到了20ul，转座后DNA的纯化也由原来的柱回收改成了直接用SDS和ddH2O 把Tn5从DNA上剥离下来。在在同一个管中实现tagmentation和PCR，不仅步骤简便，而且通量也提高了 因为PCR的聚合酶未知，所以作者测试了他们自己的酶的效果：SDS用来stripping，有...