技术分享 | 5分钟掌握免疫组化实验

发布网友发布时间：2024-04-13 17:53

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热心网友时间：2024-04-14 02:39

一、免疫组化技术简介

免疫组化（Immunohistochemistry, IHC），作为基于抗原抗体特异性结合原理的显微技术，其核心是通过化学显色，揭示组织中目标蛋白的分布、定性和定量信息。通过提取组织蛋白作为抗原，与抗体结合后，再与荧光或酶标记的二抗反应，显微镜下的清晰图像，为我们揭示了细胞内的抗原秘密。

二、免疫组化技术分类

IHC技术有多种分类，如免疫酶标法、免疫荧光法、亲和组织化学法等。其中，免疫荧光法以荧光素标记的抗体为探针，荧光信号直观显示抗原位置；免疫酶标法则通过酶标记的抗体和底物反应，生成可视的有色物质，用于细胞内抗原定位。

三、免疫组化应用广泛

免疫组化在病理学诊断中扮演重要角色，如细胞类型辨识、病变性质鉴定、肿瘤起源分析等，它就像细胞的“指纹”，使组织鉴别更为精准。其特异性强、灵敏度高和定位准确的特点，使它在生物学和医学研究领域大放异彩。

四、材料准备与实验流程

1. 切片选择：石蜡切片（保持形态和连续观察）与冰冻切片（保持免疫活性）各有优缺点。根据实验需求选择合适的切片方法。

2. 抗体选择：单克隆与多克隆抗体各有特点，选择时考虑抗体来源、种属特异性及实验目的。

3. 实验步骤：包括组织固定、包埋、切片、脱蜡水化、抗原修复、封闭非特定位点，再到一抗、二抗孵育、底物显色和封片处理。

五、常见问题及解决策略

六、注意事项

操作过程需细致，确保脱蜡和水化彻底，加液时覆盖组织；一抗冲洗要彻底，避免交叉污染；及时拍照并妥善保存样本。