简述基因克隆的基本步骤

发布网友发布时间：2022-05-03 02:11

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热心网友时间：2022-07-01 12:07

1. 扩增目的基因，比如通过PCR的方法。
2. PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。
3. 转染大肠杆菌
4. 筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。

5. 挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。

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