发布网友 发布时间:2022-04-20 22:59
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热心网友 时间:2022-06-20 14:32
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒和慢病毒。逆转录病毒载体只能感染*期细胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色体上,只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感染非*期细胞、容纳外源性基因片段大,可以长期表达等显著优点。慢病毒不产生任何有效的细胞免疫应答,可作为一种体外基因运输的工具。慢病毒载体介导的转基因表达能持续数月,且无可观察到的病理学现象。
慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。
而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装, 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染。
慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。 病毒表达系统 腺病毒表达系统 慢病毒表达系统 逆转录病毒 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 RNA病毒 是否整合 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 感染细胞类型 感染*和不*细胞 感染*和不*细胞 感染*细胞,但在干细胞中表达效率低 表达丰度 高水平表达 高水平表达 高水平表达 表达时间 快(1-2 天) 慢(2-4 天) 快(1-2 天) 滴度 滴度高达1012pfu/ml 最高可达109-10TU/ml 最高可达109-10TU/ml 克隆容量 可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低 可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低 可插入不超过6kb的外源片段 免疫原性 高免疫原性 低免疫原性 低免疫原性 动物模型 不能得到转基因动物 可产生转基因动物,效率达50以上 可以,但很难 启动子 可以更换特异性启动子 可以更换特异性启动子 不需要启动子 能否用于MIRCORNA 可以 可以 不可以 能否用于四环素诱导 不可以 TET-ON,TET-OFF 不可以