质粒提取过程中有哪些注意的问题。

发布网友发布时间：2023-12-13 20:29

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热心网友时间：2024-04-12 16:53

以常见的试剂盒提取为例:
1.菌的活性:如果菌种过久或保存不当，质粒拷贝数可能会很低，影响最终的浓度；
2.基因组DNA污染:在碱裂解时，如果溶液配制或体积不对，或剧烈震荡，会带入基因组dna；

3，蛋白污染:碱裂解后，需高速离心，如果时间或转速不够，蛋白没有完全沉降，或吸取上清时混入沉淀，会带来蛋白污染；
4，RNA污染:一般在溶液1中，要加入Rnase，如果酶活性不好，会有Rna污染；
5，乙醇没去除干净:在70%乙醇洗后，要再次离心去乙醇，如果忽视了这一步，残余的乙醇会极大的降低质粒产量；
6，洗脱buffer的选择:最好用TA等试剂盒自带的洗脱buffer洗脱质粒，如果用纯水，现在的纯水仪的纯水都偏酸，也会降低产量。