高效液相色谱方法学验证如何进行?

发布网友发布时间：2023-12-09 17:58

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热心网友时间：2024-10-23 03:31

高效液相色谱方法学验证如下：

1、专属性：查看被测物质与被测结果间是否正确且唯一对应。考察方法：将处被测成分外的其他物质均做空白干扰对照，包括流动相、辅料空白、溶剂空白、其他成分（多组分产品）空白、如果方法有衍生还应包括衍生空白等等。

2、精密度：查看方法多次测定是否能够得到相同的结果。考察方法：重复性试验，应包括仪器精密度，方法精密度（多次测定同一样品查看结果，即配制多个供试品溶液），中间精密度（不同人员不同时间不同仪器，最好试剂和实验室也更换，测定同一样品，查看结果偏差）。

3、准确度：测得结果与实际量间是否一致。考察方法：通过回收率试验来确定，应包含3个浓度至少9个样品的测定结果，测定时应采取对照品（或原料）加辅料等其他干扰，计算回收率和结果偏差。视方法而定一般回收率应在95~105%，RSD小于2%。

4、线性：在线性范围内，测得峰面积与被测物质的量是否能够呈线性关系。考察方法：线性试验，应取至少5个浓度点，绘制标准曲线，计算线性相关系数，液相色谱法中一般认为R=0.9999以上才能算呈线性。

5、定量限：当物质达到定量限浓度以上时，该方法可以对该物质进行定量检测。考察方法：当被测物峰高：信号噪音=10:1时，当前浓度即为定量限。如果想做更加可靠的实验，应在定量限处考察精密度和回收率。

6、耐用性：方法对实验环境的耐受程度。即当实验条件发生细微变化时，方法仍然能够保持测定的准确。考察方法：通过几项实验来确定：溶液稳定性（相同溶液在几小时内多次进样查看结果），色谱条件变化（应包括柱温、流速、色谱柱批次、检测波长等条件的轻微变化）。