聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离,电泳时为什么要把上层电泳曹接在负_百度...

2.不连续聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的原理根据凝胶各部分缓冲液的种类及pH值,孔径大小是否相同等,可分为连续系统和不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳(page)。连续系统是指电泳槽内缓冲液的pH值与凝胶中的相同,不连续系统则不同。不连续圆盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。上层...

空气中有氧自由基，加盖水就不会被氧化，最主要的是加了水就会把胶柱压平，如果没有水，胶柱表面会有凹面，影响后面的电泳，电泳之后染色是分条带区的，如果有凹面，会不利于观察。

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合...

这种不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳由于兼有电荷效应、浓缩效应和分子筛效应，因此具有很高的分辨率。其分子筛效应主要由凝胶孔径大小决定，而决定凝胶孔径的大小主要是凝胶的浓度。但交联剂对电泳泳动率亦有影响，交联剂重量对总单位重量的百分比越大，则电泳泳动率越小。不管交联剂是以何种方式影响电泳时的泳动...

不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。2.不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性。3隔离空气，形成平整的界面。4凝胶配制过程要...

浓缩样品分离。不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理是在电泳开始时，将样品通过浓缩胶被浓缩成高浓度的薄层，通过含有多种成分、调控pH值和凝胶孔径等因素形成非均匀电位梯度。这产生了浓缩效应、电荷效应和分子筛效应，使样品在经过分离胶后形成不连续圆盘状区带。

这是两种分类方法。前者是按电泳介质分类，后者是指仪器，用玻璃管电泳，产生的区带为圆盘状。二者可以交叉。圆盘电泳时，玻璃管中可以采用SDS聚丙烯酰胺凝胶，也可以用非变性胶。也可以用其它介质，但一般都使用丙烯酰胺。对于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，可以采用玻璃管，也可以用垂直板。

路程选择”，大分子由于孔径适配，反而能够更迅速地分离。总结来说，圆盘电泳和凝胶过滤在分子筛效应上的差异主要体现在：前者是电荷驱动的阻力依赖，大分子泳速慢；后者是基于分子尺寸的适配，大分子层析速度快。这两种技术在实际应用中，根据需要分离的分子大小和特性，会选择不同的方法。

由以上的原理可见，聚丙烯酰胺凝胶的不连续电泳主要的优点就是使蛋白质样品经浓缩胶后，形成紧密地压缩层进入分离胶。蛋白质各成分预先分开且压缩成层，可以减少在电泳时，成分间由于自由扩散而造成的区带相互重叠所带来的干扰，这样就提高了电泳的分辨能力。由于这个优点，少量的蛋白质样品（1-100g）也能...

分离胶的孔径较小所以蛋白质在浓缩胶中快速运动，到分离胶时速度变慢，就被压到一块了。加溴酚蓝其实是加上样缓冲液，这个缓冲液比重大，可以让蛋白下沉到点样孔底部，防止漂样。当然上样缓冲液中的溴酚蓝还有指示剂的作用，因为他分子小所以跑得快可以起指示作用，防止蛋白跑出胶片。