质粒DNA酶切不完全是什么现象
发布网友
发布时间：2022-05-03 11:31
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热心网友
时间：2022-06-19 12:53
质粒DNA酶切不完全，可能是你使用的试剂盒的原因也可能还有酶切的原因。
第一、抽的质粒溶在什么溶液里？如果TE中EDTA的浓度高，会影响酶切
第二、，酶切时有几个关键因素，比如酶切体系，DNA的量，酶切时间等，酶量有时过高也不好，里面的甘油会影响酶切反应。另外，你可以先切一到两个小时，再补加一点酶，这样效果比你一次加进很多酶都好。
你可以用自己配的试剂抽提看看，我们最近用自己配的试剂抽提质粒，效果很好，杂质很少，而且浓度还挺高，又经济实惠。
热心网友
时间：2022-06-19 12:54
楼主你好，我的回答是建立在双酶切的基础上的。
现象的话你通过跑一个琼脂糖凝胶电泳就能看出来，空载质粒完全切割的话应该只有一条带，没切开的话会有2-3条带，而且位置比较高。 如果是连入了目的片段的载体，那么完全切割只有两条带。未完全切割的话会有3-4条带左右。
产生原因很多：
1.可能是酶切的时间不够。
2.可能是你用双酶切的时候buffer的体系两种酶不能发挥最大功效。
3.可能是用的酶量过高导致甘油量高，一般加酶的总量不超过总体系的10%。
4.可能是两个酶切位点离的非常近。两个酶空间上冲突相互干扰。
5.可能是质粒纯化的时候里面残留的乙醇等有机物降低了酶的活性。
6.本身酶的切割效率不高，这个和生产酶的公司也有关系，你可以用一些效率比较高的酶，比如EcoRI，BamHI，SacI，BgI I等，有意识的用好一点公司的酶，比如fermentas，NEB等，国产的就算了。
这都是实验里面总结的经验，希望对你有帮助~
质粒DNA酶切不完全的可能原因有哪些
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质粒双酶切后怎么会这个样子
也就是显得比原来的更大.酶切的不彻底的话,原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看到的应该是超螺旋,所以显的比较小：）zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快,其次是线性的DNA,最后跑的最慢的是带缺口（即开环）的.用碱裂解法提取质粒看不到线性的带,...
质粒酶切后为什么会出现几条带?
如果是双酶切，而且片段大小适中，可以看见酶切的片段和载体，还有未切开的质粒。能不能区分超螺旋质粒和开链质粒，和所用琼脂糖凝胶的浓度，电泳时间，DNA纯度有关。试着延长跑胶的时间，应当是有区别的。酶切之前就有几条带，可能是因为质粒样品中有杂带，来源于杂菌或者降解。
如果一个DNA 酶解液在电泳后发现DNA 未被切动, 你认为可能是什么...
很简单嘛，做个对照啊，找个载体质粒（质粒上存在你的限制性内切酶能切开的位点）在相同条件下做酶切，电泳，观察质粒是否跟预期切开的长度一致，如果长度一致说明内切酶没有问题，你的DNA有问题；如果电泳长度与理论预期长度不一致，就说明你的内切酶有问题，换一支酶（内切酶是会过期的，请注意保质期）...
质粒pcr结果很好,为什么酶切却做不出来
提质粒的时候它们因为很短，自然不会被蛋白质细胞器基因组dna沉淀带走，最后和阴性质粒一起再接受pcr，所以出了假阳性。这也是为什么菌落pcr的假阳性远远高于菌液pcr的原因，一般菌液pcr不容易遇到假阳性的，尤其做了蓝白筛选或者用了带有致死基因的克隆载体，不过送去测序之前都最好经过酶切确认。
质粒浓度过高,酶切会有问题吗
可能是酶切过程中DNA降解了，如果是双切下来的片段很淡，可以看看切了多大的一段，太小的话容易弥散，或者没切开。双酶切省事，但是每次效率都很低，还不如单切后回收，再切一次来的好，多费不了2个小时。质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。质...
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各位高手,请教一下,我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化,老是没...
如果是这种情况，那么问题有可能是在酶切后回收这一步。回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。包括酶切回收buffer没有洗脱干净，或者留有酒精（对连接酶来说是比较致命的一点），或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题，都会影响到细菌接受质粒的。建议你重新换一个酶切回收试剂盒。并且...
