如何利用CRISPR来开展全基因组筛选

发布网友发布时间：2022-04-21 06:30

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热心网友时间：2023-07-05 01:48

如何进行CRISPR筛选？

利用CRISPR文库来开展正向遗传学筛选包括多个步骤。在大多数情况下，CRISPR文库是以极低的浓度提供的。因此，第一步就是将你的文库扩增到一定程度，足以产生慢病毒。记住，你需要使用新一代测序来检查文库的代表性，也就是扩增前后每个gRNA的比例。随后，用含有CRISPR文库的慢病毒转导细胞，产生突变细胞的异质群体，其中每个细胞或每组细胞含有不同基因的突变。

接着，利用药物选择或基于荧光的细胞分选来富集突变细胞，并筛选特定表型。例如，突变细胞可用在药物筛选中，以鉴定赋予耐药性的基因。具体来说，我们可利用某种药物来处理突变的细胞，并分析耐药性群体与对照相比的gRNA分布。在这种情况下，与突变时赋予耐药性的基因相对应的gRNA可富集起来。根据这一类型实验的结果，可了解细胞耐受药物的机理，有助于确定未来的治疗目标。