真菌代谢产物的分离纯化
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发布时间：2023-06-08 00:24
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时间：2023-08-21 14:59
1、酶的分离纯化需了解细胞制酶的流程、分离方法、以及酶制剂的保存。
酶的种类繁多，性质各异，分离纯化方法不尽相同，即便是同一种酶，也因其来源不同、酶的用途不同，而使分离纯化的步骤不一样。工业上的用酶一般无须高度纯化，如用于洗涤用的蛋白酶，实际上只须经过简单的提取分离即可。而对于食品工业用酶，则需要经过适当的分离纯化，以确保安全卫生。对于医药用酶，特别是注射用酶及分析测试用酶，则须经过高度的纯化或制成晶体，而且绝对不能含有热源物质。酶的分离纯化步骤越复杂，酶的收率越低，材料和动力消耗越大，成本就越高，因而在 符合质量要求的前提下，应尽可能采用步骤简单、收率高、成本低的方法。由于酶很不稳定，在提取时容易变性失活，因而提取酶时应注意：
(1)温度 整个提纯操作应尽可能在低温下(0～4℃)进行，以防止蛋白水解酶对目的酶的破坏作用尤其是在有机溶剂或无机盐存在下更应注意。
(2)PH值 在提纯过程中一般采用缓冲液作为溶剂，防止过酸或过碱。对一特定的酶，溶剂PH值的选择应考虑酶的PH稳定性以及酶的溶解度。
(3)盐浓度 因为大多数蛋白质具有盐溶性质，所以在抽提过程中可选用合适浓度的盐溶液以促进蛋白质溶解；但要注意当盐浓度过高时，酶容易变性。
(4)搅拌 剧烈搅拌容易引起蛋白质变性，提纯中应避免剧烈搅拌和产生泡沫。
(5)酶液是微生物生长的良好培养基，在提纯过程中应尽可能防止微生物对酶的破坏。
2、酶的制备： 从微生物（包括真菌）细胞制备酶的流程一般包括破碎细胞、溶剂抽提、离心、过滤、浓缩、干燥这几个步骤，对某些纯度要求很高的酶则需经几种方法乃至多次反复处理。
(1)破碎细胞 除了胞外酶的提取以外，所有胞内酶均需将细胞壁破碎后方可进一步抽提。破碎细胞有许多方法，动植物细胞常用高速组织捣碎机和组织匀浆器破碎，而微生物细胞的破碎则有机械破碎法、酶法、化学试剂法和物理破碎法等多种。
(2)溶剂抽提 大多数酶蛋白都可用稀酸、稀碱或稀盐溶液浸泡抽提，选用何种溶剂和抽提条件视酶的溶解性和稳定性而定，抽提时应注意溶剂种类、溶剂量、溶剂PH值等的选择。
(3)离心分离 离心分离是酶分离提纯中最常用的方法，主要用于除去发酵液中的菌体残渣或抽提过程中生成的沉淀物。工业上常用板框压滤机来完成酶的粗分离。
(4)浓缩 由于发酵液或酶抽提液中酶的浓度一般都比较低，必须经过进一步纯化以便于保存、运输和应用。事实上，大多数纯化酶的操作如吸附。沉淀、凝胶过滤等均包含了酶的浓缩作用，工业L常采用真空薄膜浓缩法以保证酶在浓缩过程中基本不失活。
(5)干燥 酶溶液或含水量高的酶制剂即使在低温下也极不稳定，只能作短期保存。为便于酶制剂的长时间的运输、储存，防止酶变性，往往需对酶进行于燥，制成含水量较低的制品。常用的干燥方法有真空干燥、冷冻干燥。喷雾干燥等。
二、一种真菌酶的具体分离纯化法：
根霉淀粉酶的分离纯化及部分性质研究
http://www.shm.com.cn (2006-08-30 11:02:40)
www.shm.com.cn/shzb/2006-08/30/content_18 ... 17K 2006-8-30 - 百度快照
参考资料：网址
