RAW 264.7细胞培养传代及冻存处理
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发布时间：2023-05-28 11:28
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时间：2023-10-03 03:35
提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面
培养基：DMEM+10%FBS+PS、培养皿、无血清冻存液等
培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37
a、将含有1mLRAW 264.7细胞悬液的冻存管在 37 水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。
b、在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。
c、然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。
传代密度：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
传代：1:2至1:3 每周3次
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次。
b、加2 mL预冷的PBS溶液于培养瓶中，使PBS溶液浸润所有RAW 264.7细胞，然后轻轻吹下细胞，将吹下来的细胞及细胞悬液收集到无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将RAW 264.7细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
a、收集RAW 264.7细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据RAW 264.7细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5 106~1 107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80 冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
2.收到细胞后第一次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
