加完trizol以后要马上提吗
发布网友
发布时间:2023-05-26 15:09
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热心网友
时间:2024-04-15 10:15
是的,加完Trizol后需要马上提取总RNA。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。如果提取的样品是瞬时转录本,马上提取可以直接进行PCR反应。如果提取的样品是蛋白质合成的mRNA,马上提取可以用于翻译蛋白质。如果提取的样品是细胞或组织的总RNA,马上提取可以用于后续的分子实验,如定量PCR、 Northern blot、microarray、RNA干扰等。
热心网友
时间:2024-04-15 10:16
具体要看你的实验要求,一般是不需要的。加800ul Trizol,样品裂解后加氯仿,分层,沉淀RNA前,加5-10ug RNase-free糖原,糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml时不会影响反转录cDNA第一链的合成,也不影响PCR反应。
RNA在Trizol试剂中不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150 ℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
用的天根的trizol,-80度冰箱的话至少存两三个月没问题,4度冰箱也能存几天。室温的话,放一个小时没什么问题,而且时间太短反而裂解不充分。
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。