pcr中镁离子用什么稀释

发布网友 发布时间：2022-12-24 21:32

我来回答

共2个回答

热心网友 时间：2023-10-10 06:13

pcr中镁离子用什么稀释
1. pcr中mg离子的作用
镁离子浓度一般用量1.5-2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。
Mg 2+浓度过低，会显著降低酶活性。Mg 2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强。Mg 2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率。Takara的mg离子的浓度一般是25mM的，20ul体系我们一般加1.2ul的MgCl2，效果挺好的
2. pcr mgcl2
标准的PCR操作程序是将各种所需反应成分分别加入PCR反应管中，然后根据具体的实验要求，设置一定的循环参数，进行循环扩增。具体如下：
(1) 向PCR反应管中依次加入
DNA模板 50～300ng (约为102～105拷贝DNA)
引物(3'→5'，5'→3')各 2μl 10μmol/L (终浓度为0.4μmol/L)
dNTP 2μl 5mmol/L (终浓度为0.2μmol/L)
10×PCR缓冲液 5μl 1/10体积 (终浓度为1×)
MgCl2 3μl 25mmol/L (终浓度为1.5mmol/L)
Taq DNA聚合酶 0.5μl (终浓度约1～5U/μl)
ddH2O 补到终体积为50μl，混匀后，离心15 s使反应成分沉于管底。
(2) 加入矿物油20～30μl（2～3滴），以避免反应液蒸发(有热盖的PCR仪可省此步骤)，然后将反应管置于95℃（变性）5min。
(3) PCR的循环程序一般为：94℃～96℃变性30s， 50℃～55℃退火30～60s，72℃延伸(1kb/1～2min)，循环25～30次。末次循环结束后，将反应管置于72℃温育5min，以确保充分延伸。
3. pcr中mg2+作用
1.化学本质都是蛋白质,
2.合成位置一般都在核糖体内.
3.作用：
解旋酶：就是作用DNA的,一般用在PCR技术中来打开一些DNA的二级结构.例如一些发卡结构,有利用DNA的复制.
DNA聚合酶：在PCR过程中,以DNA或cDNA为模板,以引物,dNTP,Mg2+等试剂为原料复制DNA所用到的一种不可或缺的酶.
RNA聚合酶和DNA聚合酶一样,只是他是用来复制RNA的.
逆转录酶：以RNA为模板,把RNA转变为单链的cDNA.以利于后续的DNA克隆以及文库构建.
*酶：就是通常所说的*性内切酶,不同酶的作用位点不一样切断DNA,一般用于分子克隆与载体构建等基因工程技术.
DNA边接酶：就是将*性内切酶切断的DN*断又重新连接成一条DNA.连接的DN*断一定是同一个*性内切酶切割产生同样粘端的片段,或者是不同酶切割产生平端的片段,但是这样的连接效率一般较低.
4.这些酶一般通过克隆,表达获得.存在不同生物体内.
4. pcr中加mg是为什么
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DN*段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
5. 在一般的pcr反应中,mg2+浓度为
以25ul的pcr体系为例，一般用浓度是25μmol/L的dNTP 2ul, 10μmol/L的引物1ul，2.5 mmol/L Mg2+ 2ul，模版一般1ul，2000u 的酶0。5ul。
buffer一般选用10x，就是稀释10倍使用，每25ul体系加10xbuffer 2。5ul。u是酶活力单位。ng就是10－9 g ；1000x μmol/L＝ mmol/L换算是x=1000 mx=1000000ux=1000000000nx x可以是g,l,mol等国际计量单位。
6. Mg离子的作用
化学方程式：Mg(OH)2 + 2NH4Cl == MgCl2 + 2NH3.H2O离子方程式：Mg(OH)2 + 2NH4+ == Mg2+ + 2NH3.H2O
7. pcr扩增mg离子浓度
因为镁离子是TapDNA酶不可或缺的辅助因子，镁离子对于稳定核苷酸和稳定扩增体系，提高tapDNA聚合酶的活性十分重要。镁离子浓度过低使酶活力降低，过高使酶催化非特异性扩增。
镁离子是由镁原子失去最外层的两个电子得到的，书写为Mg²+。
8. mg对pcr的影响
PCR实验中的Mg2+是指镁离子，一般在反应缓冲液中均含有镁离子，镁离子与聚合酶结合降低聚合反应的活化能，可以调节镁离子浓度获得最理想的反应条件。垍头条莱
9. mgcl2在pcr中的作用
Mgcl2的作用主要是促进核酸骨架的形成，影响聚合酶的4活性。Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性，浓度过低影响扩增产量。

热心网友 时间：2023-10-10 06:13

1. pcr中mg离子的作用
镁离子浓度一般用量1.5-2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。
Mg 2+浓度过低，会显著降低酶活性。Mg 2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强。Mg 2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率。Takara的mg离子的浓度一般是25mM的，20ul体系我们一般加1.2ul的MgCl2，效果挺好的
2. pcr mgcl2
标准的PCR操作程序是将各种所需反应成分分别加入PCR反应管中，然后根据具体的实验要求，设置一定的循环参数，进行循环扩增。具体如下：
(1) 向PCR反应管中依次加入
DNA模板 50～300ng (约为102～105拷贝DNA)
引物(3'→5'，5'→3')各 2μl 10μmol/L (终浓度为0.4μmol/L)
dNTP 2μl 5mmol/L (终浓度为0.2μmol/L)
10×PCR缓冲液 5μl 1/10体积 (终浓度为1×)
MgCl2 3μl 25mmol/L (终浓度为1.5mmol/L)
Taq DNA聚合酶 0.5μl (终浓度约1～5U/μl)
ddH2O 补到终体积为50μl，混匀后，离心15 s使反应成分沉于管底。
(2) 加入矿物油20～30μl（2～3滴），以避免反应液蒸发(有热盖的PCR仪可省此步骤)，然后将反应管置于95℃（变性）5min。
(3) PCR的循环程序一般为：94℃～96℃变性30s， 50℃～55℃退火30～60s，72℃延伸(1kb/1～2min)，循环25～30次。末次循环结束后，将反应管置于72℃温育5min，以确保充分延伸。
3. pcr中mg2+作用
1.化学本质都是蛋白质,
2.合成位置一般都在核糖体内.
3.作用：
解旋酶：就是作用DNA的,一般用在PCR技术中来打开一些DNA的二级结构.例如一些发卡结构,有利用DNA的复制.
DNA聚合酶：在PCR过程中,以DNA或cDNA为模板,以引物,dNTP,Mg2+等试剂为原料复制DNA所用到的一种不可或缺的酶.
RNA聚合酶和DNA聚合酶一样,只是他是用来复制RNA的.
逆转录酶：以RNA为模板,把RNA转变为单链的cDNA.以利于后续的DNA克隆以及文库构建.
*酶：就是通常所说的*性内切酶,不同酶的作用位点不一样切断DNA,一般用于分子克隆与载体构建等基因工程技术.
DNA边接酶：就是将*性内切酶切断的DN*断又重新连接成一条DNA.连接的DN*断一定是同一个*性内切酶切割产生同样粘端的片段,或者是不同酶切割产生平端的片段,但是这样的连接效率一般较低.
4.这些酶一般通过克隆,表达获得.存在不同生物体内.
4. pcr中加mg是为什么
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DN*段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
5. 在一般的pcr反应中,mg2+浓度为
以25ul的pcr体系为例，一般用浓度是25μmol/L的dNTP 2ul, 10μmol/L的引物1ul，2.5 mmol/L Mg2+ 2ul，模版一般1ul，2000u 的酶0。5ul。
buffer一般选用10x，就是稀释10倍使用，每25ul体系加10xbuffer 2。5ul。u是酶活力单位。ng就是10－9 g ；1000x μmol/L＝ mmol/L换算是x=1000 mx=1000000ux=1000000000nx x可以是g,l,mol等国际计量单位。
6. Mg离子的作用
化学方程式：Mg(OH)2 + 2NH4Cl == MgCl2 + 2NH3.H2O离子方程式：Mg(OH)2 + 2NH4+ == Mg2+ + 2NH3.H2O
7. pcr扩增mg离子浓度
因为镁离子是TapDNA酶不可或缺的辅助因子，镁离子对于稳定核苷酸和稳定扩增体系，提高tapDNA聚合酶的活性十分重要。镁离子浓度过低使酶活力降低，过高使酶催化非特异性扩增。
镁离子是由镁原子失去最外层的两个电子得到的，书写为Mg²+。
8. mg对pcr的影响
PCR实验中的Mg2+是指镁离子，一般在反应缓冲液中均含有镁离子，镁离子与聚合酶结合降低聚合反应的活化能，可以调节镁离子浓度获得最理想的反应条件。垍头条莱
9. mgcl2在pcr中的作用
Mgcl2的作用主要是促进核酸骨架的形成，影响聚合酶的4活性。Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性，浓度过低影响扩增产量。