冻干的样本,会影响DNA和RNA的提取质量吗
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发布时间：2022-04-23 09:35
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时间：2023-09-06 03:59
从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，可供选择的方法非常多，乱花渐欲迷人眼，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面，层层剥茧，分析最佳的实验方法。
1、 全血的采集保存和DNA的提取
I. 用含抗凝剂的采血管进行采血，抗凝剂一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不会影响下游的反应，如果没有采血管，也可以自己添加抗凝剂EDTA，提前准备0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配好的EDTA溶液，颠倒混匀即可。保存于-20℃至-80℃，一般2-3年内均可以提取，保存时间越短，提取的质量越高，最好在2个月内提取。
II. DNA提取方法的选择：全血提取试剂盒一般有离心柱和溶液型两种（比如Qiagen、Promega、Bioteke；摒弃酚氯仿手提的方法，时间长毒性大），原理及步骤基本相同。虽然各公司推出了N多型号，让人不知如何去选择，但从原理和操作步骤看，基本就是离心柱和溶液型两种。一般来说，离心柱（DP1801）的提取纯度高一些，但是处理量小（0.1-1ml）、得率略低；溶液型(DP2101或DP2201)的提取量大（1-10ml）得率也高于离心柱。医院的血液标本一般在2ml以上，一般选择溶液型的方法提取.在说到国产和进口差别的时候，很多人以为进口一定比国产的好，我们觉得没有最好，只有更好！在不断的进行试验优化之后，全血基因组DNA提取试剂盒DP2101或DP2201开创了第三代技术，不需要蛋白酶K消化，进口的都是要借助蛋白酶K的啊！DP2101或DP2201减少了蛋白酶K现配现用的麻烦和消化的时间，而且提取量和稳定性更好。
III. 非抗凝血（凝固血）能否提取？答案是肯定的，而且一点都不麻烦，提取效果和抗凝血没有差别！在你找遍了进口的所有品牌都找不到后，回过头来您才发现原来他就在身边，百泰克的凝固血基因组DNA提取试剂盒已经有很多忠实的用户。
2、 全血RNA如何提取
I. 全血RNA提取过程哪些是RNA降解的因素？
全血中RNA酶是非常丰富的，RNA在没有保护的状态下很容易降解！哪些是状态RNA不受保护呢，比如红细胞裂解液裂解红细胞的过程，红细胞裂解液是低浓度的平衡盐溶液，没有抑制RNase的成份，这时候RNA不受保护；DNA酶消化的时候RNA也不受保护，这个时候也没有抑制RNase的成份。
II. 什么样的提取方法更好？
我们在选择方法的时候要倾向于对RNA全程有保护的方法！一般的方法都是先用红细胞裂解液裂解红细胞，然后从白细胞提取核酸，还要经过DNA酶的消化去除DNA，这种并不是最好的方法，过程中有很多RNA降解的因素。所以直接裂解法是最好的方法，将采集的血液迅速加入3倍体积的裂解液RLS——RP4001血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)的裂解液，迅速颠倒混匀。裂解液RLS含有强烈的蛋白变性剂，能迅速变性蛋白，是RNase变性，不能对RNA降解。
