染活死后能染鬼笔环肽吗

发布网友发布时间：2022-12-21 10:43

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热心网友时间：2023-10-12 22:28

鬼笔环肽染料的染色方法：鬼笔环肽 (phalloidin) 是一种双环七肽毒素，它能选择性的与动植物体内的纤维状的肌动蛋白 (F-actin) 结合，这种特殊的选择性使之成为研究细胞内肌动蛋白微丝 (F-actin) 的有力工具。在光学显微镜下, 荧光标记过的鬼笔环肽 (phalloidin-dye conjugate) 可以清晰地显示出细胞内微丝的形态和分布，广泛被应用于生物医学的研究当中。常用来标记鬼笔环肽的荧光染料包括以下几种：FITC, Rhodamine, TRITC or similar dyes, such as Alexa Fluor® 488 or iFluor 488.由于鬼笔环肽无法穿越细胞膜，所以不能直接应用于活细胞的染色；鬼笔环肽实验所用的样品在染色前需要固定，例如可以用甲醛固定和透化细胞或组织切片，此外标记过的鬼笔环肽也可染色去石蜡后的石蜡包埋的样品。有什么注意事项：鬼笔环肽对pH敏感：提高pH会使结构中关键的硫醚桥键被切断，导致鬼笔环肽失去和肌动蛋白的亲和力。
根据 GLP（Good Laboratory Practice）操作要求，鬼笔环肽具有2mg / kg的 LD50 毒性。但是，实验使用的浓度很低，不会造成重大的危险。
鬼笔环肽染色可与抗体一起使用，可以添加在一抗或二抗孵育步骤时共染。
鬼笔环肽缀合物染色的最佳浓度和孵育时间根据细胞类型，固定条件，样品制备过程或细胞与组织的通透性不同而有所变化。
避免使用含有甲醇或丙酮的固定剂，这些会破坏肌动蛋白的结构而影响鬼笔环肽染色效果。
悬浮细胞可以使用 poly-D-Lysine 的板或盖玻片贴壁，然后使用贴壁细胞方案染色。
用 PBS+ 1％BSA 的溶液提前孵育一下固定细胞20-30分钟，可能会改善染色。
在使用盖玻片上的细胞染色时，尽量将盖玻片置于有盖子的容器中以减少蒸发。
如果细胞看起来不是非常健康，可以在染色和洗涤时加入 2–10% serum。
当用于未固定的样品时，鬼笔环肽与肌动蛋白 (actin) 的结合会导致微丝末端的解离速率降低，通过防止长丝解聚来稳定肌动蛋白丝 (actin)。

热心网友时间：2023-10-12 22:29

由于鬼笔环肽无法穿越细胞膜，所以不能直接应用于活细胞的染色；鬼笔环肽实验所用的样品在染色前需要固定，例如可以用甲醛固定和透化细胞或组织切片，此外标记过的鬼笔环肽也可染色去石蜡后的石蜡包埋的样品。

热心网友时间：2023-10-12 22:29

我观察的是心肌细胞，有丝*，能否把鬼笔环肽直接加到活细胞里。在活细胞工作站下观察细胞动态。具体染色方法是什么？染色后细胞能活几天？可否再用DAPI染核。同时观察。