含GFP或标签蛋白的重组蛋白的选择
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发布时间：2022-12-27 18:38
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时间：2023-10-20 21:50
1、GFP蛋白分子量比较大，如与目的基因形成融合蛋白也许会影响目的蛋白的功能，其优点是便于观察。
2、GFP，CFP，YFP tagging：适合于观察 蛋白在细胞内的定位，不适合用于一般的蛋白实验，因为本身大小都在25kda左右，而且这样的荧光质粒的蛋白表达量，相比要小一些。
1、标签蛋白通常只有几个氨基酸，其与目的基因结合一般不会影响目的蛋白的功能，而且市场化的标签抗体可用来检测外源基因的表达或纯化。
2、His, Myc, Flag, HA 标签： 由于本身大小只有 2kda左右，不会影响蛋白作用，而且，一般所选用的promotor也比较强，蛋白表达量也很多，足够一般的任何生物实验，一般用于蛋白相互作用等试验。一般不能用于定位。
3、推荐：sigma --> Flag, santa cluz--> HA
注：参考丁香园相关网站汇总。
1、首先，需要确定融合标签的目的
2、考虑融合标签的影响
任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。最主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。
3、考虑是在N-端还是C-端标记
N-端或C-端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建N-端标记和C-端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。
参考： https://zhuanlan.hu.com/p/29096502
