大肠杆菌实验最少进几次实验室
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发布时间：2023-04-10 13:04
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时间：2023-10-07 09:30
3.液体培养基用于大肠杆菌的扩大培养。将人肠杆菌和有液体培养基的三角瓶放在左手中，靠近酒精灯火焰；右手拿着接种坏，并 用右手无名指和小指夹住斜面的棉塞和三角瓶封II膜。接种环在火焰上烧红，再深入到斜面， 使环接触培养基冷却后，再取菌种。将菌体放入三角瓶的封II膜和斜面的棉塞复原。三角瓶 在37°C摇床上震荡培养12h （转速200转/分）。这一步骤由老师完成。4.划线分离，分离菌种。在酒精灯火焰上灼烧接种坏，将摇床上培养12h的菌液（老师代做）打开，接种坏部分深 入到菌液中（只一次）。然后，在固体培养基的平板上连续划，接种环只在菌液中笼菌液一 次，划线后盖好培养基。将培养皿倒置（盖在下面），放在37°C恒温培养箱中培养12-2411 后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已经被分离。划线的目的是分离菌种。用接种环以无菌操作取细菌悬液一坏，在平板培养基的一边，做第一次平行划线2〜3条。转动培养皿约70度角，用烧过冷却的接种坏，通过第一次划线部分，做第二次平行划线。用同法通过第二次平行划线，做第三次平行划线。注：每卞一次的划线之前都需要将接种环灼烧灭菌，待接种坏冷却后，接种环需通过上一次的划线获得菌种后再进行下一次的划线分离（如图E、C,我们这么做就是为了使第一次划线后的菌种浓度降低，以达到得到单菌落（分离菌种）的目的）。5.菌种保存在无菌操作下将单菌落用接种坏取出，再用划线法接种到斜面上，37°C培养24h后，4°C冰 箱保存。4°C是一个保菌温度。篇二：大肠杆菌的培养与分离一、大肠杆菌1.大肠杆菌属于革兰氏 性菌，为 型的肠道杆菌。2. 结构:属于 生物。3. 用途:是在 技术中被广泛采用的工具。4. 与人类的关系:它生活在人类的 中，一般对人 （“有”还是“无”）害。有一些菌株对人体能产生危害，因为它们可以侵蚀 并产生 。任何大肠杆菌如果进入人的 系统，都会对人体产生危害。答案：1•阴兼性厌氧2.原核3.基因工程
4.肠道无肠黏膜毒素泌尿二、细菌的培养和分离1.细菌的培养：（1）细菌的繁殖:细菌以 的方式繁殖,*速度很快，约 *一次。（2） 培养细菌的方法：培养细菌，需要将转移到 中,一般用 来转移带菌的培养物。（3）用不同培养基培养细菌的差别：接种后，培养细菌的培养基类型接种方法接种后培养的时间（单位:小时）培养结果液体培养基接种坏直接接种培养8h后每毫升培养基中有 个细菌固体培养基 用接种环在培养基上用的方式接种（该法还可以用于 ）培养10-20 h后一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞，这些细胞形成 2.细菌的分离：（1）分离的方法与特点:分离细菌有 和 2种。前者方法简单，后者操作复杂,但是 更易分开。答案：1.(1)*20 nun (2)已有细菌的培养物新的培养基接种坏(3)几亿划线分离细 菌紧紧聚集在一起菌落2.(1)划线分离法涂布分离法单菌落(2)划线分离固体平面划线培养三、 灭菌操作1.灭菌操作的原因:为了获得 的培养物，其关键是防止外来 的入侵污染。因此，在培养微生物时必须进行 操作。2.无菌操作的条件：(1)首要条件是 必须是无菌的；(2) 必须是无菌的；(3) 的过程必须是无菌的等。答案：1•纯净杂菌无菌2.⑴各种器皿(2)各种培养基(3)菌转移操作四、 大肠杆菌的培养和分离实验1•实验目的：(1)进行大肠杆菌的 ，利用 培养基进行细菌培养的操作；(2)进行大肠杆菌的 ，用 培养基进行细菌的 培养；(3)说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。2.实验步骤(1)灭菌:用 在 力卞对lb液体培养基、lb固体培养基和培养皿进行灭菌mine(2)自 向 中转移并分装固体培养基：待冷却至 左右，将三角锥形瓶中的 培养基，在 上分装至几个 中,制成 培养基。(3)将大肠杆菌自 转移到 中的 培养基中培养：将大肠杆菌用 在无菌操作下接种至三角锥形瓶中的 培养基中，在摇床振荡培养 ，完成大肠杆菌的培养。(4)将菌液在 培养基上进行 分离：从前一步培养得到的菌液中获取菌种，用 以 法接种至第二步所制得的培养基中，在 °C恒温箱中培养 h后观察菌落。(5)菌种保存:
在无菌操作下将 用 取出，再用 法接种在 上, 培养 后 冰箱保存。3.分离实验的结果及相应结论：观察中若看到在 的末端出现 ，则表明菌已被分离了。4. 大肠杆菌分离的用途: 的通用方法，也是用于 的最简便方法之一。答案扩增液体(2)分离固体平面划线2.(1)高压锅1kg 15⑵三角瓶 培养皿60 °C固体超净台培养皿固体平面(3)斜面 三角瓶液体接种坏液体37 °C 12 h (4)固体平面划线接种坏划线固体平面37 12〜24 (5)单菌落接种坏划线斜面37 °C 24114 °C
3.划线不连续的单个菌落4.消除污染杂菌筛选高表达量菌株核心解读hexmjiel.微生物、细菌与人肠杆菌之间有怎样的关系？(1)概念内涵:其关系图解见下(2)结构上:三者都是结构简单，形体微小的生物，但是从细胞角度看其结构是不同的,具体如 下：2.培养大肠杆菌的lb培养基中有各种物质，为什么选择这些物质，这些物质有什么作用呢？(1)人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出了供其生长繁殖的营养基质一一培养基。 虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有五大营养要素,即水、无机盐、碳源(提供碳元 素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同，有物种差异，它主要补充自身 不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质)。见下表：微生物的营养要素定义功能类型化合物类型常用物质碳源凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营养物质称为碳源构成细胞物质，供 给微生物生长发育所需要的能量无机碳(自养型微生物用)无机物co2> nahco3> caco3等 有机碳(异养型微生物用)蛋白质、核酸类牛肉膏、蛋白腺、花生粉饼、明胶、氨基酸等 糖类脂质等葡萄糖、蔗糖、淀粉等氮源凡是构成微生物的细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源主要是提 供合成原生质和细胞其他结构的原料,一般不作能源无机氮钱盐nh3、(nh4)2so4*盐kiio3112空气有机氮牛肉膏、蛋白腺、醇母膏、尿素、明胶等生长因子一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源自行合成的所需极 微量的有机物一般是酶和核酸的组成成分酵母膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦 芽汁等，复合维生素水作用:组成成分;反应介质;物质运输媒体;热的良导体无机盐作用:维持渗透压、ph等(2)大肠杆菌的lb培养基微生物的营养要素本实验中人肠杆菌lb培养基配方培养基配方与微生物营养要素的对 应 关系lb液体培养基lb固体培养基氮源、碳源、无机盐、
生长因子、水琼脂1 g蛋白K 0.5 g主要提供人肠杆菌的氮源、碳源需求酵母提取物0.25 g主要提供生长因子nacl 0.5 g提供无机盐水501111提供水(3)此外配方中还要注意ph等。3.该实验中这些操作的原因(1)三角锥形瓶中的lb固体培养基灭菌后，需要冷却到60 °C左右时，才用来转移和分装，制 成固体平面培养基，为什么?你用什么简易方法快速估计该温度？因为三角锥形瓶中的lb固体培养基中有琼脂，它在98 °C以上熔化，在44匸以下凝固，当冷 却到60 °C左右时，不会因温度过高烫手而不易操作;也不会因为温度过低而使三角锥形瓶中 的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。 简易估计温度的方法:可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由烫手 转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到60 °C左右了。(2)进行恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴 留在盖子上;如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿 中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的 目的，培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。篇三：大肠杆菌的分离与培养教案生物实验技能考核教案题目《人肠杆菌的分离和培养》教案学院—化学和生命科学学院班级—生物科 学102班 __ —姓名—杜艳花 学号联系电话一18758912261 (612261)指导老师张萍华口期：2013 年 7月4日《人肠杆菌的分离与培养》教案一、 实验教材分析本节内容选自浙科版生物选修1第1部分实验1大肠杆菌的分离和培养。本次课程主要包 括了本次实验的目的、人肠杆菌的特点、无菌操作和灭菌的方法、仪器设备和实验材料、实 验步骤等内容。在前一节介绍了实验室规则和生物技术概况的基础上，进行具体的实验操作。 并且经过生物必修三册书本的学习，学生已经掌握了一定的细菌的相关知识，并对一些特殊 细菌的筛选和鉴别有了一定的了解。故本次实验教学既是对学生前面学的理论知识的深化, 同时也为学生将要学到的分离以尿素为氮源的微生物等内容奠定了比较重要的基础。因此, 本节课起着承前启后的重要作用。
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实验,大肠杆菌的培养和分离
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篇一：实验1人肠杆菌的培养和分离实验教学提纲
实验1大肠杆菌的培养和分离教学提纲
实验目的
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3.说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料
1.配制LB液体培养基，蛋白腺
