感受态细胞的制备
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发布时间：2022-04-22 14:29
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时间：2023-10-18 10:26
感受态细胞的制备如下：
1、实验仪器及试剂
仪器超净工作台，摇床，高压灭菌锅，培养箱，*机，超低温冰箱，离心机，接种环，试管，摇瓶（2L），平板，移液*，*头，离心管(500mL),EP管(1.5mL),蓝盖瓶，泡沫箱
试剂CaCl2溶液PIPES1.51g，CaCl2•2H2O4.41g，甘油75ml，pH=7.0，定容至500ml。LB培养基（固体、液体）Tryptone1.00g，Yeast0.50g，NaCl1.00g，定容至100ml。（固体培养基加入1.5%的琼脂）
抗性卡那霉素，氨卞青霉素，氯霉素，四环素。材料感受态菌株
2、实验方法及操作步骤
取－80℃冻存的感受态菌株，用接种环划线分离接种于固体平板上（平板抗性根据感受态选择），做好标记，倒置于37℃培养箱培养过夜。
第二天，从平板上挑取单个菌落，接种至含有4mlLB培养液（抗性根据感受态选择）的试管中，37℃,195rpm，震荡培养过夜。次日取菌液4ml接种至含有400mlLB培养基（抗性根据感受态选择）的2L摇瓶中，37℃，200rpm震荡培养约2-3小时。
当菌落OD600nm值达到0.3－0.5时，将摇瓶取出放置于冰上10-15min。在无菌条件下把菌液倒入500ml的预冷的离心管中，离心4℃,3000r，8min。
弃去上清，加入约200ml的预冷的CaCl2溶液，吹打混匀，悬浮菌体，放入冰浴30min。离心4℃,3000r，8min，弃去上清，加入约8ml预冷的CaCl2溶液，重新悬浮菌体。
将用CaCl2溶液处理后的菌体分装于1.5ml的EP管中，每管110ul，保存于-80℃的超低温冰箱中。
拓展资料：
感受态，是指宿主细胞最容易接受外源基因并实现将其转化的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的。
同时也受菌龄以及外界环境因子的影响，比如Ca2+就可以大大促进转化的作用。细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。
