dna的粗提取与鉴定实验中将洋葱研磨液过滤到烧杯中在4摄氏度冰箱中放置几分钟
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发布时间：2022-05-30 17:08
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时间：2023-10-20 15:37
【实验原理】
1DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物
质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
2，DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进
一步提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
4.细胞有两脂质膜，细胞膜和核膜(植物细胞还具有细胞壁)，洗涤剂可以溶解细胞的细
胞壁，去除脂质和蛋白质。
【实验器材】
菜花(或洋葱等)、洗涤剂、NaCl、研钵、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒(10ml1支)、滴管、试管(20ml2支)、天平。
95%酒精、蒸馏水、0.015moVLNaCl、二苯胺试剂、研磨液。
【实验步骤】
(1)、材料准备
1.将新鲜菜花和95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24小时。
2.量取50ml洗涤剂，称取0.5g NaCl。
3.配制0.015mol/LNaCl溶液:称取0.88gNaCl投入1000ml容量瓶中，加水到所
需体积的刻度线上，溶解后成0.015mol/LNaCl溶液(已配好)。
4. 配制二苯胺试剂:
A液:0.2g二苯胺溶于10ml冰醋酸，再加1.1ml浓硫酸(比重1.84)，若冰醋酸不纯，试剂呈蓝色或绿色，则不能使用。
B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。(已配好)配制:将0.1mlB液加入到10mlA液中，现用现配。
(2)、DNA的粗提取
1. 取材:称取30g菜花，去梗取花，切碎。
2、研磨:将菜花放入研钵中,倒入10mL研磨液(同时加入洗涤剂)，充分研磨10min。
3.过滤:将研碎的液体用漏斗和纱布过滤到烧杯中。(也可将滤液倒入塑料离心管
中进行离心，用1000r/min的旋转频率，离心2~5min;取上清液放入烧杯中)。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
4.加冷酒精:将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的酒精溶液中，
并且玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀3~5min
后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，絮状物会缠在玻璃
棒上。这就是DNA。
(3)DNA的鉴定
取两支试管，分别标记 1、2号，各加入0.015mol/LNaC12ml，将所得的白色絮状物
取出一部分放入1号试管，搅拌使其溶解，然后，向两试管中分别加入2ml二苯胺试剂混
合均匀后在沸水浴中加热5-10min，观察颜色变化。在加热过程中，随时注意试管中溶液
颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
