许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ'基因，其编码的产物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG 存在下，可以产生蓝色沉淀
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发布时间：2022-05-30 17:27
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时间：2023-10-22 07:41
（2）由图可知，目的基因的左侧有*酶EcoRI的识别序列，右侧是*酶Sma I的识别序列，而质粒上只有*酶EcoRI的识别序列，所以需要用*酶EcoRI来切割质粒，用*酶EcoRI和Sma I来切割含有目的基因的外源DNA分子，这样就使目的基因右侧无法与质粒连接，所以目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接*酶EcoRI切割形成的末端，即-TTAA，连接过程中需要DNA连接酶．
（3）将目的基因导入大肠杆菌细胞之前，应先用Ca2+处理大肠杆菌，使其处于能吸收周围DNA的感受态．
（4）用*酶EcoRI切割质粒时，会破坏质粒上的lacZ'基因，但切割后的质粒自身环化后，lacZ'基因又被修复，能表达产生B-半乳糖苷酶，在X-gal和IPTG 存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，所以菌落①②呈现蓝色；菌落③导入的是重组质粒，其lacZ'基因被破坏，不能表达产生B-半乳糖苷酶，在X-gal和IPTG 存在下，菌落颜色为白色．
（5）检测目的基因是否表达产生蛋白质，可采用抗原一抗体杂交法．
故答案：（1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用
（2）-TTAA DNA连接酶
（3）Ca2+
（4）菌落③lacZ'标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出3-半乳糖苷酶，故菌落为白色
（5）抗原一抗体杂交
