提纯的蛋白出现沉淀影响做western blot吗

这对做western并没有影响，可以直接把浓缩胶部分切掉只做分离胶部分的转膜 那么残留的蓝色就不会影响到转膜的效果

3. 跑胶前，需进行蛋白浓度检测，若浓度偏低，可能是蛋白提取不成功。4. 转膜后，使用丽春红染色，若观察到明显的蛋白条带，说明转膜效果良好。5. 显色后，检测内参和目的蛋白的表达情况。6. 若蛋白未完全变性，应提高SDS浓度并延长煮沸时间。7. 若蛋白浓度过高，应加入缓冲液稀释至适宜浓度。8. 降...

western blot样品煮蛋白后结块是经常会有现象 如果是SDS-PAGE，加了上样缓冲液后依然煮蛋白后结块，那说明蛋白样品浓度过高，已经超出了SDS可以结合的浓度。建议降低样品的浓度即可 如果没有加含有SDS的上样缓冲液，那么就是蛋白样品被煮沸后变性沉淀了。加入溶解剂即可 ...

做组织匀浆以后，再分离组织碎片和蛋白，但是分离过程可能没有那么好，组织中含有的各种杂质，杂蛋白就比细胞中要多，要复杂。因此选择适当的方法提取组织蛋白，对于后续的Western来说还是非常重要的，这也是为什么细胞的蛋白做WB挺好，但是换到组织，可能有些条件就需要进一步优化了。

1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。2.凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶...

做好Western需要注意各种细节。工欲善其事,必先利其器,首先还是从蛋白提取开始谈起。 1.收样前3min先配制细胞裂解液(现配现用),RIPA:蛋白酶抑制剂:磷酸酶抑制剂=99:1:1。6孔板收集蛋白每孔需200ul,计算用量。以收集六孔蛋白为例,按比例加入RIPA 1200ul,蛋白酶抑制剂12ul,磷酸酶抑制剂12ul,混匀后置于冰上...

看什么pull down了，如果抓的是完全未知的蛋白，那就没法做了，因为不知道是什么蛋白也找不到抗体。一般会去做MS鉴定。但如果是做验证的pull dowm，或者已经有一个比较靠谱的预测，那肯定是要通过WB来判断抓到的蛋白是否是预期的蛋白的。

如果对蛋白酶敏感，保存的时候没有重新添加蛋白酶抑制剂，很可能就降解了，对低温敏感也是一样。但前一种机率大一些 而如果丰度不高，那么稍微降解以后，WB可能就不易检测到了。或者检测到的条带比较弥散，在泳道里面有不止一个条带，结果分析会有问题。所以如果你比较了解目标蛋白的情况，可以试试，...

5 细胞水平要做western blot,多少细胞提的蛋白够做western blot? 答:一般5×106就足够了。 6 同一样品能同时提RNA又提蛋白么?这样对western blot有无影响? 答:能,没有问题。 7同一蛋白样品能同时进行两种因子的Western Blot检测吗?答:当然可以,有的甚至可以同时测几十种样品。 8 蛋白变性后可以存放多久? 答...

在进行Western免疫印迹实验时，所需的主要试剂包括以下成分：1. 丙烯酰胺和N，N’-亚甲双丙烯酰胺应以温热的去离子水配制，比例为29%(w/v)丙烯酰胺和1%(w/v)N，N’-亚甲双丙烯酰胺。储存于棕色瓶，于4℃避光保存，确保pH值不超过7.0，以避免脱氨基反应，有效期不超过两个月。如出现沉淀，可...