蜡样芽孢杆菌污染是怎么回事
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发布时间：2022-04-23 06:41
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时间：2022-06-16 19:43
蜡样芽孢杆菌是需氧性、有运动性、能产生芽孢的革兰氏阳性大杆菌。蜡样芽孢杆菌常在下列中存在，如乳、肉、蔬菜、甜点心、调味汁、凉拌菜、炒饭等。往往因不加热或加热不完全引起食物中毒。针对我对日出口高温杀菌中出现的*现象，经反复检测、试验，确定引起*变质的微生物为蜡样芽孢杆菌。本试验的目的为检测高温杀菌蜡样芽孢杆菌的污染现状与控制措施。
1 材料方法
11 设备和材料
吸管、培养箱、均质器、天平、菌落计数器、冰箱、微波炉、平皿、滤器、抽滤设备、无齿镊子。
12 培养基及试剂
NGKG寒天基础培地、NaCl、95％酒精、鸡蛋。
2 检测方法［1，2］
21 水中蜡样芽孢杆菌的检测方法
211 原理
用孔径为045mm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上培养，计数滤膜上的典型蜡样芽孢杆菌菌落总数。
212 检验步骤
过滤水样：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将1000ml水样（如水样含菌数较多可减少过滤水样量或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门在-50kPa下抽滤。
培养：水样滤完后抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分移放在表面干燥的加卵黄的NGKG寒天培地上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入恒温箱内，35℃培养48h。
结果观察：菌落特征为：35℃培养18h后，观察菌落，形成直径3～5mm，有的约10mm大而扁平、灰白色、粗糙的菌落。菌落表面粗糙似有毛玻璃状或溶蜡状，边缘呈扩展状。另外，在菌落周围因卵磷脂作用而形成明显的白至淡粉色的沉淀环。根据菌株不同，也有卵黄反应稍弱不形成沉淀环的。即典型菌落应符合蜡样芽孢杆菌特征：中心菌落呈白色不规则状，即一般不呈光滑的圆形，不呈典型凸起状，而是扁平凸起；白色菌落外是淡粉色环；必须有卵黄反应（在集落周围形成因卵黄作用形成的明显的浑浊圈，根据菌株不同，也有卵黄反应稍弱，形成浅浑浊环的东西）。
计数方法：在规定的培养时间内，取出平板观察，计数。
22 和环境中蜡样芽孢杆菌的检测方法
221 原理
蜡样芽孢杆菌呈卵磷脂酶阳性，在卵黄培养基上形成菌落周围明显的沉淀环。另，本菌在多粘菌素B中呈自然耐性，利用这些特性，使用作为选择分离培养基的加卵黄的NGKG寒天培地。
222 实验作
样品制备：以无菌作称取25g样品于灭菌均质杯内，加入225ml灭菌085％盐水，均质拍打30s，制成1∶10的样品匀液。预想到菌落会多的情况，进行梯度稀释。
分离接种：用无菌吸管分别吸取各梯度稀释液01ml分注到2个表面干燥的加卵黄的NGKG寒天培地上。
培养：迅速以L行玻璃棒将接种物涂布于培地表面，避免涂到平板边缘，将平板正置，直至接种物被培养基吸收，将平板翻转，35℃培养48h。
菌落观察：同上。
计数方法：在规定的培养时间内，取出平板观察，计数直径3～5mm，有时10mm的大扁平、灰白色、粗糙的集落。若吸取各梯度稀释液01m1分注到2个表面干燥的加卵黄的NGKG寒天培地上，则每g (ml)食品中蜡样芽孢杆菌的总数=2个平板上的菌落数的算术平均值×相应的稀释倍数×10。
例：将检样10-1稀释液各01ml涂布于2个NGKG寒天培地平板上，各生长蜡样芽孢菌20个，则1g样品中蜡样芽孢杆菌数为：
[(20+20)／2]×10×101=20×103个／g
23 污染的检测
231 中蜡样芽孢杆菌的检测方法（如上）
232 水中蜡样芽孢杆菌的检测方法为滤膜法[1] 使用测余氯的方法为比色法[2]。目的是研究自来水中的游离余氯对蜡样芽孢杆菌的影响。
24 杀灭研究
蜡样芽孢杆菌耐热，其37℃16h的肉汤培养物的D80值为10~15min；使肉汤中细菌(24×107/ml )转为阴性需100℃20min。其游离芽胞能耐受100℃30min，而干热灭菌需120℃60min才能杀死。蜡样芽胞杆菌在4℃、pH43、盐浓度18％的条件下仍能存活或生长。通过高温杀菌或适当的冷藏可以控制蜡样芽胞杆菌的增殖。且蜡样芽孢杆菌喜农作物，一般以芽孢的形式存在于食品中，在
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