蛋白质的测定bradford法是什么?

发布网友发布时间：2022-11-20 21:07

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热心网友时间：2024-08-11 06:41

bradford法测定蛋白质含量，也就是考马斯亮蓝法，其原理是考马斯亮蓝在游离状态下呈棕红色，最大光吸收在488nm; 当它与蛋白质结合后变为蓝色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

扩展资料：

考马斯亮蓝法该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。

由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 g-球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

参考资料来源：

百度百科-考马斯亮蓝法

热心网友时间：2024-08-11 06:41

Bradford法是由Bradford于1976年提出的一种蛋白质浓度测定方法。该方法基于Coomassie Brilliant Blue G-250染料与蛋白质结合时的颜色变化。在没有蛋白质存在的情况下，此染料是红棕色的，但当它与蛋白质结合时，染料会变成蓝色。通过测量吸光度，可以确定蛋白质的浓度。
Bradford法的主要优点是：
1.反应特异性高，与大多数非蛋白性化合物不发生反应。
2.反应迅速，几分钟内就可以完成。
3.不需要复杂的制备步骤。
4.比其他蛋白质测定方法更为稳定和可靠。
然而，Bradford法也有一些局限性，例如对不同的蛋白质其灵敏度可能会有所不同，因此建议使用已知浓度的标准蛋白进行标准曲线的制备。
在实验室中，Bradford法经常用于蛋白质提取和纯化过程中的样品浓度测定，以及其他需要快速测定蛋白质浓度的应用。