蛋白质提取方法比较
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发布时间：2022-04-22 09:39
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热心网友
时间：2023-07-13 04:38
1.机械破碎法（匀浆）
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利用机械力将细胞破碎。常用的设备：高速组织捣碎机，匀浆器，研钵等。
不同组织的特性来选择不同的方法，动物的胰肝脑一般较柔软，用普通匀浆器研磨即可，而肌及心肌组织较韧，需预先搅碎成匀浆。
2.超声破碎法
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利用震荡频率为15-25KHz的超声波在细胞液中产生的空化效应和机械效应将细胞膜破碎的方法，多用于细胞裂解。
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注意事项：（1）为了避免在溶液中产生泡沫，要将超声探头完全置于液面以下，并不接触的前提下尽可能靠近容器底部。（2）应该使用塑料试管，避免使用玻璃试管。（3）超声剂量应由样品量和菌体来决定，攻率可以在200-600w。过强的超声波可导致多聚物降解和蛋白失活。如果超声出现沉淀说明超声功率太大。（4）一般超声5-10s，反复多次。（4）将试管置于冰水中以避免蛋白质变性和失活。
3.反复冻融法
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将细胞在-20度以下或液氮条件下冰冻，室温溶解，反复多次。
特点：成本低，操作简便，过程缓慢，但不适用于对温度比较敏感的蛋白质。
END
4.表面活性剂裂解及酶解法
自溶法：利用自身的酶将细胞破使细胞内物质释放出来。该法比较稳定，且蛋白不易分解。自溶过程中PH会有显著的变化。
酶融法：利用生物酶使细胞成分溶于溶剂中。
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表面活性剂处理：通过破坏细胞膜磷脂双分子层将胞内物质释放出来。
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时间：2023-07-13 04:38
此法分离和纯化抗原的原理是利用各颗粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度梯度层内，达到彼此分离的目的。
2、选择性沉淀法
其原理多根据各蛋白质理化特性的差异，采用各种沉淀剂或改变某些条件促使蛋白质抗原成分沉淀，从而达到纯化的目的。常用的方法是盐析沉淀法。
3、凝胶层析法
凝胶层析是利用分子筛作用对蛋白质进行分离。凝胶是具有三维空间多孔网状结构的物质，经过适当的溶液平衡后，装入层析柱。
4、离子交换层析法
离子交换层析的原理是利用一些带离子基团的纤维素或凝胶，吸附交换带相反电荷的蛋白质抗原。由于各种蛋白质的等电点不同，所带的电荷量不同，与纤维素(或凝胶)结合的能力有差别。
5、亲和层析
亲和层析是利用生物大分子的生物特异性，即生物大分子间所具有专一亲和力而设计的层析技术。例如抗原和抗体、酶和酶抑制剂(或配体)、酶蛋白和辅酶、激素和受体、IgG和葡萄球菌蛋白A(SPA)等物质间具有一种特殊的亲和力。
