免疫共沉淀实验的原理与过程？

发布网友 发布时间：2022-04-22 11:00

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热心网友 时间：2023-10-11 18:46

免疫共沉淀Co-IP实验是一种通用的蛋白质相互作用研究方法，常用来鉴定两个或多个蛋白质之间可能存在的相互作用关系。
coip实验的原理：Co-IP实验通常依赖于特异性判断，即将目标蛋白质及其交互蛋白带有特定抗体空间上结合，并利用这一结合关系来沉淀出其它交互蛋白。
免疫共沉淀实验过程：
1、细胞裂解：首先需要将细胞或组织裂解释放内部蛋白质，使目标蛋白质能够被识别。
2、抗体偶联：接着需要将一个已知与目标蛋白质相互作用的特定抗体或蛋白A/G浸润到裂解产物中，以便定向提取相互作用的蛋白质。
3、Co-IP：使用分别偶联不同的亲和树脂来捕获不同的蛋白质。再通过洗涤、离心等操作，去除非特异性结合的蛋白质，最终将纯化后的蛋白质物通过电泳等技术进行分离和定量，来评估目标蛋白质与其潜在交互伙伴之间的相互作用关系。
4、检测已沉淀的交互蛋白：可以利用Western blot、ELISA等技术对沉淀下来的蛋白质进行定性和定量分析，来鉴定其中的交互蛋白，并观察其表达量、大小和含量等信息。
Co-IP实验是一种快速、方便、可靠的蛋白质相互作用研究方法，具有高度的特异性和敏感性。它的主要优点在于荧光共振能量转移FRET和近距离扩散BRET等新的高通量分析方法的引入，这一技术也是分析蛋白质相互作用的主流方法。

热心网友 时间：2023-10-11 18:47

亲，您好！免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）以抗体和抗原之间的专一性结合作用为基础，用于检测和确定生理条件下蛋白质之间的相互作用。其基本原理是将细胞在非变性条件下裂解，在细胞裂解液中加入特异性的抗体，这样抗体可以和已知的抗原形成抗原–抗体复合物，如果在系统中存在与已知抗原相互作用的蛋白质，该蛋白质也会以复合物的形式沉淀下来，经过洗脱就可以得到与已知抗原相互作用的蛋白质，然后进行SDS-PAGE及Western blotting分析。
实验步骤
（1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液含蛋白酶抑制剂冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C， 最大转速离心30 min后取上清（2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜（3）取10μlproteinA琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3,000 rpm离心3min；（4）将预处理过的10μlproteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连。