【科研】PCR引物设计原则
发布网友
发布时间：2022-09-05 18:35
我来回答
共2个回答
热心网友
时间：2024-06-25 18:26
引物设计是决定PCR反应成败的最重要因素。引物设计有两个主要考虑因素：特异性和扩增效率。特异性是由错配的频率决定的，特异性差的引物易产生错误的扩增产物。扩增效率是指引物以每循环增加两倍扩增产物达到理论最优的能力。
遵循原则如下：
1. 引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10 kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。引物过短，会降低产物的特异性，每增加一个核苷酸，引物特异性可以提高 4 倍。引物过长，会使退火过程不完全，与模板结合不充分，以至引起扩增产物的明显减少。
2. 引物末端： 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；引物 3’端应避免出现发夹结构。
3. 引物G+C：含量 引物的GC含量控制在40%-60%之间。
4. Tm值：引物额外附加序列，即与模板非互配对序列，不应参与引物 Tm 的值计算；正向引物和反向引物的Tm值相差不超过5℃为佳，Tm值调整至55℃ -65℃为佳。
5. 碱基的分布：引物 A、G、C、T整体分布要尽量均匀，避免使用GC或者AT含量高的区域；避免连续出现4个及以上的相同碱基，或者某两个核苷酸连续重复出现（例如，ACCCC或ATATATAT；引物内部或者两条引物之间避免有5个碱基以上的互补序列；两条引物的 3’端避免有3个碱基以上的互补序列。
6. 序列特异性：引物设计完毕请使用 NCBI BLAST功能检索引物特异性，以避免非特异性扩增产生。注意: PCR的产量通常取决于PCR引物的3’端，引物间形成二聚体会降低扩增效率。
热心网友
时间：2024-06-25 18:27
① 特异性：引物应在保守区内设计并具有特异性，引物与非特异扩增序列的同源性不要超过70%或有连续8个互补碱基同源。
② 引物长度：一般在15~30碱基之间，引物有效长度Ln=2(G+C)+A+T，Ln值不能大于38。（Ln>38时，最适延伸温度会超过Taq DNA聚合酶的最适温度74℃，不能保证产物的特异性）
③ 目的片段二级结构：要扩增的片段单链不能形成二级结构，扩增片段长度为100~600碱基对。
④ 引物二级结构：引物自身连续互补碱基不能多于3bp，一对引物间连续碱基的同源性或互补性不能多于4bp。
⑤ 引物的5′端：可以被修饰而不影响扩增的特异性。5′端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入突变位点；插入与缺失突变序列和引入启动子序列等。
⑥ 引物的3′端：绝对不能进行任何修饰，3′端也不能有形成任何二级结构的可能，引物3′端不要终止于密码子的第3位。
⑦ TM值：按公式Tm=4(G+C)+2(A+T) 估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为50~70℃。尽可能保证上下游引物的Tm值一致，一般不超过 2℃。若引物中的 G+C 含量相对偏低，则可以使引物长度稍长，而保证一定的退火温度。退火温度约为TM-4。
⑧ GC含量：G+C含量在40%~60%之间。四种碱基的分布最好随机，不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区引发错误。
【科研】PCR引物设计原则
1、引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。扩增产物的单链不能形成二级结构。1引物应具有特异性。2、③引物内部不应出现互补序列。④两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3′端的互补重叠。3、PCR...
pcr仪外观设计
作为上海为肯工业设计有限公司的工作人员，我可以回答关于pcr仪外观设计的问题。PCR仪是一种常见的实验室设备，用于进行DNA复制和检测。为了确保外观设计符合用户需求和市场趋势，我们采用了现代化、简洁的外观设计风格，以白色和灰色为主色调，突出了产品的科技感和高端形象。同时，我们注重人体工程学设计，确保操作简便、舒适，适用于不同身高的用户。此外，我们还将产品标识和品牌元素融入其中，增强了品牌传播效果。总之，我们的PCR仪外观设计注重现代化、简洁、人体工程学和品牌传播，以满足用户需求和市场趋势。上海为肯工业设计公司，专注医疗仪器设备设计10年，为肯工业设计公司专业医疗仪器设备设计,致力于治疗仪器,诊断仪器,医用分析仪器,医院仪器设备,监测仪,家用医疗仪器,康复设备,急救设备等产品设计,214年以上行业经验
【科研】PCR引物设计原则
遵循原则如下：1. 引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10 kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。引物过短，会降低产物的特异性，每增加一个核苷酸，引物特异性可以提高 4 倍。引物过长，会使退火过...
pcr引物设计的基本原则有哪些
1、PCR引物设计的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。2、遵循原则如下：引物长度：引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整Tm值，引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10kb长片段时，25-35个碱基之间的引物可以提供...
pcr引物设计的基本原则有哪些
PCR引物设计的11条黄金法则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primerlength...
科研干货丨手把手教你做PCR引物设计!
PCR过程中，引物设计的精准性直接影响实验结果。以下是关键的设计原则和注意事项：引物长度通常在15-30bp，以18-27bp最为常见，避免过长影响Taq DNA聚合酶的延伸效率。引物GC含量应保持在40%-60%，推荐45-55%，过高或过低都会影响反应效果。上下游引物需保持接近的Tm值。目标Tm值在72℃左右，确保复性...
PCR引物设计PCR引物的设计原则
在进行PCR反应时，设计合适的引物至关重要。首要原则是，引物应在核酸序列的保守区域中选取，确保其具有高度的特异性，避免与非目标序列产生非特异性杂交。引物的设计需要考虑二级结构问题，理想情况下，产物应避免形成稳定的二级结构，如发夹或二级转录产物，以保证PCR扩增的效率和准确性。引物的长度通常控制...
如何进行pcr引物设计
原则：引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。产物不能形成二级结构。引物长度一般在15到30碱基之间。G加C含量在百分之40到60之间。碱基要随机分布。引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物之间不能有连续4个碱基的互补。引物5撇端可以修饰。引物3撇端不可修饰。引物3撇端要避开密码子的第3位。
pcr扩增的引物怎么设计
PCR扩增的引物设计需要遵循一定的原则，包括引物长度、GC含量、退火温度、特异性以及避免引物二聚体和发夹结构的形成。PCR（聚合酶链式反应）是一种在体外快速扩增特定DNA片段的技术，而引物是PCR反应中不可或缺的组成部分。引物的设计直接影响到PCR的效率和特异性。以下是设计PCR引物时需要考虑的关键因素：...
引物设计的原则有哪些
所谓的引物是用来做PCR的，高质量的引物是PCR成功的前提，然而部分朋友就想知道，究竟引物设计的原则有哪些呢？引物设计 1、引物与模板的序列要紧密互补。2、引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。3、再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。
引物的设计原则
引物设计原则 1、长度：15—30bp，其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。2、G十C含量：应在40%一60%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时，其Tm恒等于4...
