的技术,能不能对细菌这样的微生物进行基因测序
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发布时间：2022-08-26 21:36
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时间：2024-11-23 17:12
基因组DNA测序文库构建
1. 对收到的DNA样品进行检测，取2-3ul样品，用1%的琼脂糖胶检测，对于纯度不够（含RNA或蛋白）的DNA样品需要柱纯化后重新检测。
对于细菌基因组需要扩增16S全长序列，进行验证。
对于噬菌体或者质粒样品，若用16S全长引物扩增，无目的条带则无细菌基因组污染，若出现目的条带则存在污染，需要去除后建库。
2. 用Qubit检测DNA样品浓度。
3. 吸取部分DNA样品，用TE或Elution Buffer稀释，终浓度在10ng/ul-30ng/ul之间，体积为130ul。用Covaris破碎，破碎时请根据需要片段大小，按标准操作流程操作。
4. 样品足够多的情况下，可以取适量破碎后的产物进行PAGE
胶或者琼脂糖胶检测。
5. 对破碎后的产物进行柱式法（5倍体积的B3+100-200ul异丙醇）浓缩回收，加入50-100ul TE或Elution Buffer洗脱。回收产物用Qubit测值。
6. 修平和磷酸化
